problemes de culture cellulaire

[invite8135ca60]

Je bosse sur des cellules cos-7 et depuis 2 mois je n'arrive pas à les maintenir en vie.
J'ai bosser l'année dernière dessus, il n'y a pas eu de problemes mais depuis le retour de l'été, je les décongèle, elles semblent pousser comme il faut mais au bout de deux semaines de culture elle se mettent à mourir (avec plein de vacuolles à l'interieur: apoptose?).
Je ne comprend rien, il s'agit des même aliquots de cellules que l'an dernier, exactement les même milieux et même temperature et % de CO2.
Si c'est dejà arrivé à l'un d'entre vous, comment as t 'il resolu le probleme, ou alors est ce que quelqu'un à une idée d'ou cela pourrait venir?
Merci d'avance.
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[invite3014d637]

Je bosse sur des cellules cos-7 et depuis 2 mois je n'arrive pas à les maintenir en vie.
J'ai bosser l'année dernière dessus, il n'y a pas eu de problemes mais depuis le retour de l'été, je les décongèle, elles semblent pousser comme il faut mais au bout de deux semaines de culture elle se mettent à mourir (avec plein de vacuolles à l'interieur: apoptose?).
Je ne comprend rien, il s'agit des même aliquots de cellules que l'an dernier, exactement les même milieux et même temperature et % de CO2.
Si c'est dejà arrivé à l'un d'entre vous, comment as t 'il resolu le probleme, ou alors est ce que quelqu'un à une idée d'ou cela pourrait venir?
Merci d'avance.

Bonjour,
Y'aurai pas eu changement de lot de Sérum par hazard?
Moi ca m'est arrivé une fois et ca c'était dû au sérum...

[invite8135ca60]

Eh non pas de changement de lot de milieu, de serum, de trypsine ou encore d'antibio.
J'ai aussi oublié de preciser que les cellules ne sont pas mycoplasmées (double test: marquage dapi et test fluo mycoalert) et egalement que les autres types cellulaire présent dans l'incubateur poussent normalement!!

[invite4ab31fa6]

bonsoir,
Je ne fait jamais de culture cellulaire donc je vais peut être dire un truc qui va vous sembler idiot. Mais bon je me lance quand même car ce que tu décrit ressemble bigrement à ce qui est arrivé à un copain. Ses cultures mourraient et ses cellules présentaient des vacuoles.
Je suis cytologiste de formation et il m'a refilé en désespoir de cause un echantillon de cellules moribondes. Une petite coloration de Papanicolaou sur ces cellules permettait de voir que les vacuoles étaient centrées et que les contours de la vacuole étaient trés marqués. Cela évoque une infection par chlamydia ou mycoplasme.
Mon pote à alors fait faire une analyse bactériologique et c'était bien des chlamydia.
Peut être qu'ils avaient de mauvaises pratiques dans son labo (ce dont je doute).
Ensuite ils ont tout décaper dans son labo et aprés tout est redevenu dans l'ordre.
Si cela peut t'aider vérifie cette voie.
bon courage!

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite3014d637]

Bonsoir, peut être que ce que je vais dire est stupide... mais n'aurait t'il pas vu ce genre d'infection au DAPI?

[invite4ab31fa6]

Bonsoir, peut être que ce que je vais dire est stupide... mais n'aurait t'il pas vu ce genre d'infection au DAPI?

Non non c'est moi qui suis stupide je n'avais pas lu le deuxième message de Lashwar. Méa culpa je ne referais plus, promis.

[piwi]

Parfois on n'a pas d'explication. Il m'est arrivé une fois de voir toutes mes cellules (des cos aussi) canner du jour en lendemain. Pas d'explication, j'ai tout viré, j'ai tout changé et c'était reparti. Il suffit de peu, le lot qui a mal vieilli, qui est mal décongelé.

Courage.
piwi