Cycle cellulaire

[invite0cd70211]

Sur le site de la société invitrogen, vous trouverez deux excellentes présentations en anglais: introduction à la cytométrie et analyse des résultats

Cliquez sur le lien ou couper coller:

http://probes.invitrogen.com/resourc...ow/player.html

http://probes.invitrogen.com/resourc...is/player.html
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[invite77749503]

Bonjour chers amis du forum,

Je tiens tout d'abord à vous remercier pour vos différents éclaircissements sur le sujet (cycle cellulaire). J'ai une question consernant la synchronisation des cellules à une phase donnée ( J'ai bien compris vos différentes explications), mais mon réel souci est de savoir si après avoir synchronisées les cellules en G0 ou G1 par exemple, les cellules peuvent encore se diviser (redémarrer) si je les traite avec un agent mitogène ou le serum.
Ma deuxième question porte sur le double marquage PI et Ki67 ou PCNA. L'aviez vous déjà fait ? si oui, faut il forcément faire une perméabilisation au Paraformaldéhyde sachant que mes cellules vont être ou ont été fixées à l'alcool ? Si vous avez des conseils pratiques, je suis bien disposé à les recevoir.
Merci de me repondre et surtout merci de votre attention.
Leonard DV.

J'ai fait que le marquage avec le PI,
Le PI se lie aux cellules qui ont perdu leur integrité, il se lie au noyau des cellules, avant de mettre le PI, on met le tampon de citrate qui casse tout, il n'y a que les noyaux qui restent. Pourquoi fixer les cellules?

[invitec25c96a0]

Bonjour,

Après fixation à l'éthanol il est préférable d'utiliser un perméabilisant comme le tween 20, triton ou Np40 ou saponine (le choix est vaste). Pour la saponine, il faut l'utiliser également dans les tampons de lavage.
Ces produits s'utilisent à des concentrations de l'ordre de 0.1%.

NB la Paraformaldéhyde n'est pas un perméabilisant.

cordialement