Nombre de copie de plasmide

[invite4074fe79]

Bonjour,

J'ai un petit soucis avec une question sur ma préparation de TP sur l'analyse de l'ADN plasmidique des Escherichia Coli.

Voici la question :

Vous disposerez au départ de 3 ml de culture bactérienne ayant poussé toute la nuit, cela représente 3.10^9 bactéries. En admettant que vous avez purifié 1µg d'un plasmide de 3000 Bp. Calculer le nombre de copie contenu dans une bactérie.
Le poids moyen d'une base est estimé à 310 Dalton pour l'ADN.

Je ne souhaite pas la réponse mais juste une aide =).

J'avais pensé à faire le poids total des bactéries en Bp mais après j'ignore comment mettre en relation le 1µg et les 3000 Bp du plasmide =S.

Si quelqu'un pouvait m'éclairer ne serais ce qu'un peu je vous en remercie d'avance !!
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[invitee863e61a]

Bonjour,

J'ai un petit soucis avec une question sur ma préparation de TP sur l'analyse de l'ADN plasmidique des Escherichia Coli.

Voici la question :

Vous disposerez au départ de 3 ml de culture bactérienne ayant poussé toute la nuit, cela représente 3.10^9 bactéries. En admettant que vous avez purifié 1µg d'un plasmide de 3000 Bp. Calculer le nombre de copie contenu dans une bactérie.
Le poids moyen d'une base est estimé à 310 Dalton pour l'ADN.

Je ne souhaite pas la réponse mais juste une aide =).

J'avais pensé à faire le poids total des bactéries en Bp mais après j'ignore comment mettre en relation le 1µg et les 3000 Bp du plasmide =S.

Si quelqu'un pouvait m'éclairer ne serais ce qu'un peu je vous en remercie d'avance !!

Il te manque la correspondance entre l'unité de masse atomique Da, et l'unité de masse g, qui est telle qu' 1 mole d'atomes pesant chacun 1 Da pesera en tout 1g
(1 unité Da x Nombre Avogadro = 1g)

Donc 1 mole de bases pesera .... g
Bon courage pour la suite

[invitefd74fc7f]

bonjour jai la mem questions... ca doit etre la mem fac lol mé je narive pa a faire cette exercice ... HELP merci

[invite30157012]

Heu... je voudrais pas dire mais ça fait quand même trois discussions sur ce sujet, faudrait peut-être arrêter là...!

[A voir en vidéo sur Futura]

[piwi]

Bonsoir,

Les daltons c'est comme la masse molaire, 1 Da= 1 g/mol.
Du coup ce que l'on attend de vous c'est:

1. trouver la masse du plasmide
2. trouver le nombre de moles de plasmides
3. trouver la quantité de plasmide que cela représente (nombre d'Avogadro)
4. faire une division par le nombre de bactérie que vous aviez.

Cordialement,
piwi

[invite44aeec87]

Bonsoir,

Les daltons c'est comme la masse molaire, 1 Da= 1 g/mol.
Du coup ce que l'on attend de vous c'est:

1. trouver la masse du plasmide
2. trouver le nombre de moles de plasmides
3. trouver la quantité de plasmide que cela représente (nombre d'Avogadro)
4. faire une division par le nombre de bactérie que vous aviez.

Cordialement,
piwi

Bonsoir Piwi,

Ayant quelques soucis avec ma préparation de biologie moléculaire, j'ai cherché un peu sur le net et je suis tombée sur ton explication qui date de bientot 3 ans. Il faut que je réponde exactement a la même question que mon prédécesseur.
J'ai bien noté ton raisonnement, mais, même avec ça, et avec différents débuts de calculs je me retrouve vite bloquée, il y a quelque chose qui m'échappe...

Alors je te demande ton aide... je vais te copier le début de mon raisonnement (ne te moque pas si c'est faux , je veux trouver où ça cloche)


une base pèse 310 Da donc 3000 pb pèsent 3 000 x 310 = 930 000 Da (ce nombre me parait deja enorme... )

1 Da = 1 g/mol soit 930 000 Da = 930 000 g/mol

930 000 g <-> 1 mole
1 µg = 1.10(-6) g <-> 1.08.10(-12) moles

et là je bloque d'autant plus que j'ai la forte impression que tout ce qui précède est faux ...

Merci d'avance pour ton aide

[piwi]

Il y a effectivement un souci, mais il ne doit pas être là vous l'imaginez.

L'ADN est double brin, une base fait 310 g/mol et vous avez un plasmide de 3000 pb. Alors la masse molaire de ce plasmide est 310x2x3000 (3000 pb = 6000 bases). PM = 1 860 000 g/mol (la masse molaire vous paraissait grosse? Elle l'est encore plus! ^_^ )

Vous avez 1µg, combien cela représente il de moles?
PM = M/N avec PM: masse moléculaire, M la masse et N le nombre de moles. Donc, N = M/PM. 10^-6/ 1 860 000 = 5.38.10^-13 moles.

Je vous laisse trouver ce que cela représente en nombre de plasmides.

Cordialement,
piwi

[invite853321bf]

bonjour jai la mem questions... ca doit etre la mem fac lol mé je narive pa a faire cette exercice ... HELP merci

C'est donc vrai... maintenant même en fac ils écrivent mal... Misère

[invite44aeec87]

Il y a effectivement un souci, mais il ne doit pas être là vous l'imaginez.

L'ADN est double brin, une base fait 310 g/mol et vous avez un plasmide de 3000 pb. Alors la masse molaire de ce plasmide est 310x2x3000 (3000 pb = 6000 bases). PM = 1 860 000 g/mol (la masse molaire vous paraissait grosse? Elle l'est encore plus! ^_^ )

Vous avez 1µg, combien cela représente il de moles?
PM = M/N avec PM: masse moléculaire, M la masse et N le nombre de moles. Donc, N = M/PM. 10^-6/ 1 860 000 = 5.38.10^-13 moles.

Je vous laisse trouver ce que cela représente en nombre de plasmides.

Cordialement,
piwi

Ah oui, effectivement j'avais un gros souci entre l'ADN double brin et mon raisonnement ... :/
En tout cas je vous remercie pour votre aide, la suite a coulé de source, j'ai obtenu 108 copies/bactéries et je pense être dans le vrai.
Merci encore !