Oui je suis d'accord avec toi, c'est sans doute le plasmide. C'est en plus assez simple a testerEnvoyé par nanane21
Sinon le fait de mettre trop de matrice fait que les amorces vont avoir tendances a s'apparier sur des sites aspecifiques....
maintenant je le redis j'y crois pas trop dans la mesure ou meme avec l'ADNg tu as le meme phénomene.
Tu pourrais avoir la photo de l'autre groupe qu'on puisse comparer?
YOyo
Euh, je pourrais avoir la photo de l'autre groupe, mais peut-être pas ce soir..Je vais voir ce que je peux faire...
Sinon le prof pense que ça vient des amorces mais il ne sait pas quoi....
Peut-être est-ce un problème inresolvable!!
J'ai jeté un oeil dans les photos de la technicienne qui bosse avec moi. Elle se tape 500 PCR par semaines (bon pas trop en ce moment mais en général c'est ça). Autant dire que j'ai pu regarder des tonnes de PCR
Comme je vous le disais (avec ma petite expérience des PCR) on retrouve quand même souvent des bandes dédoublées quand la PCR n'est pas parfaitement optimisée et quand il y a beaucoup de matériel au départ. Un coup c'est la bande du dessus qui est plus forte que l'autre un autre coup c'est l'inverse.
Moi je ne m'affolerais pas plus que cela.
Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
De par mon expérience, il arrive régulièrement que des petits produits de PCR migrent en une double bande, sans que cela n'indique qu'il y ait 2 produits distincts.
OK..Bon alors d'aprés vous je fais une petite parano??(ça se soigne je pense)
Sinon pour Yoyo je met la photo de l'autre groupe.
En tout cas, merci encore une fois
Merci nanane
La en effet voici une PCR sans probleme.
Bon alors on y apprend plusieurs choses. Tout d'abord c'est bien la bande du haut qui est celle que vous vouliez! donc c'est la plus faible dans votre échantillon.
Ensuite, vous avez un smear sous vos deux bandes que l'autre groupe n'a pas. Cela viens probablement d'amplification a specifiques ou de primers/dimers (appariement des amorces sur elles memes), mais ca me semble grand pour etre ca.
UNe remarque, en comparant les deux photos, j'ai l'impression que vous avez forcé sur le contraste en prenant la photo non?
La bande du haut (qui est censé etre le plasmide) n'est pas a la meme taille sur les deux gels! (sic!!!) je veux bien que les plasmides superenroullés ne migrent pas toujours de la meme facon mais la c'est suspect quand meme.
Est-il possible que le prof se soit gourrer de plasmide? (bon courage pour lui poser la question lol)
En fait ce qu'il faudrait faire est recommencer la PCR pour voir si vous obtenez la meme chose. Vou spouvez deposer aussi une deuxieme fois vos echantillons mais bcp moins genre 5x moins pour voir ce qu'il se passe. Mais je ne pense pas que ca soit ca le probleme.
Si ca persiste la seule solution pour en avoir le coeur net, est de purifier ces deux bandes et de les séquencer...
YOyo
Merci pour vos conseils mais pour refaire les expé pour vérifier on ne poura pas le faire (c'est un TP, et une fois fini on ne peut pas continuer..)
Je vérifierais pour les tailles des plasmides (même si je vous crois sur parole..), mais comme vous le dites pour lui faire accepter ça, ça va etre dur (quoique, on a fait des digestions qui n'on pas marché, donc puorquoi pas....)
En tout cas j'ai pas mal de pistes pour expliquer le problème..
Encore merci, c'est agréable de s'être sentie écoutée!!
lors d'une amplification genique le nombre de copie d'adn natif c-a-d plasmidique sont negligeable par rapport a la portion d'adn recherché et si on obtient un signal il est tres minime
