Arrêt de la fourche de réplication chez coli

[invite9d3ba709]

salut à tous!!!!

je dois trouver un moyen d induir des arrets des pauses dans la fourche de rep.

pouvez vous me renseigner sur le protocole à realiser pour réussir.

merci d avance pour votre aide.
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[invite8f0c515e]

Tu dois trouver un moyen c'est à dire un moyen qui existe déja o en trouver un nouveau et avoir un prix nobel? Je suis pas expert mais je vois à peu près comment marche le complexe de duplication. Tu dois pouvoir jouer à plusieurs niveaux. Au niveau de l'ARNpol qui produit des amorces prolongées par les ADNpol (quoique le brin précoce ne serait pas trop affecté ou alors indirectement). Au niveau de l'ADNpol directement (mais comment empécher son fonctionnement?) ou des facteurs de processivité associés. Ou encore mieux au niveau de l'hélicase. Là, pour le coup t'empèches la double hélice de s'ouvrir donc tu bloques ta fourche de réplication à coup sûr. Tu pourrais éventuellement bloquer les topoisomérases qui dévrillent L'ADN en amont de la fourche. Enfin voilà c'est loin tout ça et ce ne sont que des pistes hasardeuses...

[invite9d3ba709]

tout d abord merci pour ta réponse.
mais je pense que dans tes pistes , l initiation de la replication dés le début ne pourra pas se faire.
mon but serait plutot de l arreter un peu plus loin (spécifiquement dans le meilleur des cas) dans la replication.

salut

[invite8f0c515e]

Mais tu dois faire ça "in vivo"?
Pour la spécificité la seule solution c'est reconnaissance d'une séquence particulière avec une amorces complémentaires qui se fixerait au simple brin après l'hélicase et avant l'ADNpol, c'est à dire au niveau de la flèche (photo en pièce jointe). Le problème c'est si tu le fait "in vivo" ça risque d'être difficile d'"injecter" mass amorces sans nuire à la bactérie.
Je te met le lien de la vidéo complète pour y voir plus clair.
http://fr.youtube.com/watch?v=49fmm2WoWBs

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite9d3ba709]

et utiliser un plasmide contenant un TER B du chromosome de coli??????
qu est ce t en pense?

[invite8f0c515e]

Ben en fait je vois pas ce que t'entend par TER-B!

[invite17a570c1]

Salut,

Peux-tu préciser ton contexte parce que là on part dans des spéculations à l'aveuglette...

Sinon, mettre un Ter au niveau de l'ORI... Ca risque de ne pas trop aimer, les positions de l'ORI et du Ter sont précises et ont une importance chez E. coli. Ensuite, tu peux spéculer avec une introduction d'un dimère de T et une mutation dans une protéine de reconnaissance du dimère de T. Ainsi, ta polymérase sera bloquée, mais ne pourra pas continuer.

Bon, je dis ça au pied levé, il faut que tu donnes plus de détails sur ton protocole et surtout ton but.


Cordialement,