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PCR et témoin négatif



  1. #1
    missy12

    PCR et témoin négatif


    ------

    sur mon gel d'agarose j'observe une bande dans la colonne de mon puit contenant le témoin négatif.
    est-ce normal?
    merci

    -----

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  4. #2
    IngDr

    Re : PCR et témoin négatif

    En général non, mais tout dépend de la taille de la bande. Ca peut être les amorces, des dimères d'amorces, voire de la matrice, s'il y en avait beaucoup. Une petite photo du gel pourrait aider.

    Cordialement

  5. #3
    missy12

    Re : PCR et témoin négatif

    merci pr ta réponse !

    une autre question, comment faire pr estimer la taille des bandes sachant que l'on dépose 7µL de produits PCR mais que la ladder correspond a 500ng d'ADN

  6. #4
    IngDr

    Re : PCR et témoin négatif

    j'ai pas bien compris ta question ! Rien n'est comparable dans ce que tu viens d'écrire.
    Relis toi et tu verras ...

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #5
    missy12

    Re : PCR et témoin négatif

    benh en fait je ne sais pas comment faire pour estimer la quantité relative d'ADN present

  9. #6
    IngDr

    Re : PCR et témoin négatif

    Citation Envoyé par missy12 Voir le message
    merci pr ta réponse !

    une autre question, comment faire pr estimer la taille des bandes sachant que l'on dépose 7µL de produits PCR mais que la ladder correspond a 500ng d'ADN
    ceci est incompatible.
    Quelle est ta question : quantifier la quantité d'ADN obtenu ou estimer la taille du produit de PCR ?

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  11. #7
    missy12

    Re : PCR et témoin négatif

    je veux évaluer la taille des bandes (en pb)
    et estimer la quantité relative en ng/µL

  12. #8
    IngDr

    Re : PCR et témoin négatif

    Le ladder, est ce un "vraie" échelle de taille, auquel cas c'est facile d'estimer la taille du produit de pcr par rapport aux tailles connues pour le ladder. (la vraie méthode consistant a faire une courbe étalon log(taille)=f(distance migrée dans le gel), et d'utiliser cet étalon pour retrouver la taille de la bande en fonction de sa migration).
    Concernant la quantité relative. En général pour les ladders commerciaux, on peut connaitre la quantité d'ADN pour une ou plusieurs bandes du marqueurs de taille. Apres il faut comparer l'intensité du produit de PCR avec l'intensité des bandes du marqueurs de taille.
    Mais cette méthode n'est que tres approximative. L'idéal serait de faire une gamme d'une quantité connue et de comparer.

  13. #9
    missy12

    Re : PCR et témoin négatif

    merci bcp de ton aide

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