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Bleu de charge



  1. #1
    eije

    Bleu de charge


    ------

    hello

    j'aimerais savoir si quelqu'un aurait une recette pour du bleu de bromophénol car la mienne n'est pas bonne : mon bleu bave partout, il est très épais et foncé. il faut dire qu'il ya 10g de saccharose pour 20ml final ce qui me semble beaucoup.
    Merci pour vos réponses.

    -----

  2. #2
    IngDr

    Re : Bleu de charge

    Non la quantité de saccharose a l'air OK.
    C'est plutôt que tu as du mettre bcp trop de BBP. En général, c'est une toute petite pointe de spatule. Dans ton cas pour 20ml, il aurait fallu 40mg.
    Les protocoles que tu trouves partout sur le net donne :
    1.5M Saccharose,
    0.003M BBP
    dans du tampon TE

    http://www.google.com/search?q=tampo...ient=firefox-a

  3. #3
    eije

    Re : Bleu de charge

    j'ai mis 0.4g de Bleu soit 10 fois plus que ce que tu préconise, puis 10.2g de saccharose et 0.02g de Tris dans 20 ml (eau) final.
    bon je vais essayer de mettre 40mg de bleu.
    merci

  4. #4
    Patfol

    Re : Bleu de charge

    Je me posais une question concernant les DNase et le tampon de charge. Celui ci n'est pas autoclaver ou autre, est ce que le bleu de bromophenol inhibe les DNase qu'il pourrait y avoir dans le tampon ou ailleurs?

  5. A voir en vidéo sur Futura
  6. #5
    IngDr

    Re : Bleu de charge

    Tout dépend des applications, mais on travaillant proprement, c'est à dire sans laisser les pot de poudre ouverts, avec du TE autoclavé, du moment que tu n'as pas de contamination bactérienne dans ta solution, je ne pense pas que les quelques DNase qui trainent puisse te poser problème.
    D'autant plus que pour être dans un environnement complétement DNase free, faudrait penser à tout stériliser (bloc pour couler l'agarose, cuve à electrophorèse, tampon de migration, etc...)

  7. #6
    Patfol

    Re : Bleu de charge

    Merci pour la réponse, j'avais oublier que le tampon a la baseil est autoclavé....

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