ARNI/ARNIII,l'un plutôt que l'autre

[invite86fe4f5c]

salut à tous je profite de la chance d'avoir de grands scientifiques pour poser mes questions,hihi.

Voilà,comme je sais que les "Grands scientifiques" sont souvent occupes(recherches,experieces, ...),je me contenterai des reponses qui viennent de tout le monde(je suis gentil ,hein?

Bon voilà mon arsenal de questions:(desole si mes questions sont des questions de details.[et ne me renvoyez pas svp à mes cours parce-que tous ce que je pose n'y est pas]


1°Lorsque l'on effectue une transcription reverse,l'oligo T(en 3') qui sert d'amorce provient d'où?elle provient d'une transferase terminase,ou bien d'autre part(dans l'experience originelle)?

2°A part des rôles dans la replication legerement differents,qu'est ce qui differencie l'Enzyme de Kornberg(DNA pol I) de la DNA polymerase III?

A part l'activité exonucleasique(DNA polI)[fragments d'Okazaki],qu'elle ne fait même pas toute seule apparement,ce sont toutes les deux des polymerases!!!
Bon avant,j'eu cru comprendre que l'enzyme de Kornberg ne pouvait pas repliquer de grands fragments d'adn(1000-2000),et qu'elle fesait enormement d'erreurs lors de la replication d'un adn(in vitro par exemple).Ce qui explique pourquoi l'ativite de l'ADN polIII est preponderante lors de la replication,neamoins on utilise quand même cette DNA polI dans maintes experiences(PCR;sequençage selon Sanger;Transcription reverse,etc...),est ce normal?[Ou bien c'est un bête petit detail sans importance?]

3°....je voulais poser la même question que dans un autre post surlequel personne n'a encore reagit(patience,patience,)


PS;si vous pouviez juste pour me dire dans quel cas il est preferablen d'utiliser l'un plutôt qu'un autre,ça serait vraiment bien(cfr 2°)
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[invite86fe4f5c]

hehe,salut,desole,juste pour faire remonter le sujet,j'espere qu'il y aura quelques reponses.

[inviteb6144ea4]

Bonjour,

1°Lorsque l'on effectue une transcription reverse,l'oligo T(en 3') qui sert d'amorce provient d'où?elle provient d'une transferase terminase,ou bien d'autre part(dans l'experience originelle)?

je ne comprends pas bien ta question. Si c'est ce que tu demandes, lorsque l'on fait une RT-PCR, les amorces oligodT sont déjà synthétisées dans le kit et s'hybrident directement avec la queue poly(A) des ARNm.

A part des rôles dans la replication legerement differents,qu'est ce qui differencie l'Enzyme de Kornberg(DNA pol I) de la DNA polymerase III?

A part l'activité exonucleasique(DNA polI)[fragments d'Okazaki],qu'elle ne fait même pas toute seule apparement,ce sont toutes les deux des polymerases!!!
Bon avant,j'eu cru comprendre que l'enzyme de Kornberg ne pouvait pas repliquer de grands fragments d'adn(1000-2000),et qu'elle fesait enormement d'erreurs lors de la replication d'un adn(in vitro par exemple).Ce qui explique pourquoi l'ativite de l'ADN polIII est preponderante lors de la replication,neamoins on utilise quand même cette DNA polI dans maintes experiences(PCR;sequençage selon Sanger;Transcription reverse,etc...),est ce normal?[Ou bien c'est un bête petit detail sans importance?]

Effectivement elles n'ont pas le même rôle dans la réplication:
- la DNA pol I élimine les amorces RNA et, simultanément, synthétise le fragment ADN manquant à partir de l'ectrémité 3' du fragment d'Okazaki suivant
- la DNA pol III allonge les amorces (sur le brin continu et le brin discontinu)

Une autre différence entre ces deux enzymes:
- la DNA pol I possède une activité exonucléasique 5'-3' et est peu processive
- la DNA pol III possède une activité exonucléasique 3'-5' (par sa sous-unité epsilon) et est tres processive (associé à la protéine beta)

[invite86fe4f5c]

merci pour l'apport,la clarification et la confirmation,maintenant,pourqu oi dans les experiences historiques on utilise preferentiellement l'ARN pol I,si elle est moins performantes?

Bon,je crois que t'as dis que c'etait parceque l'ADN pol III,etait inoperante toute seule(sans facteurs/enzymes),est ce la seule raison?

[A voir en vidéo sur Futura]

[inviteb6144ea4]

Bonjour,

et désolé pour le retard (beaucoup de choses à faire...)

Oui effectivement tu as raison l'ADN pol I est souvent utilisé, notamment dans le cas de la technique de Sanger. Et je ne sais pas trop pourquoi non plus. Je ne m'étais jamais posé la question.
Toutefois, il faut préciser que la plupart du temps c'est le fragment de Klenow qui est utiliser pour Sanger: comme ça pas d'activité exonucléasique et donc pas de risque d'avoir des fragments incomplets.

Pour la PCR, c'est quand même plus souvent la Taq polymérase qui est utilisé.

Voilà, désolé de ne pouvoir t'en dire plus. Si j'apprends deux-trois trucs à ce sujet je viendrai les poster