salut à tous,
SVP si quelqu'un pourrai m'expliquer le principe de la technique RFLP ( le polymorphisme de longueur des fragments de restriction de l'ADN ), et comment il sert à l'etablissement des caryotypes ainsi que la detection de certaines maladies génétiques.
Merci.
Bon tout d'abord un fragment de restriction est un morceau de DNA qui a été coupé par un enzyme de restriction (enzyme coupant le DNA)
La majorité de ces enzymes coupent le DNA une fois qu'ils ont reconnu une séquence particulière dans celui ci (par exemple l'enzyme EcoR1 coupe dès qu'il repère la séquence GATC).
Grâce à cette méthode on peut caractériser des morceaux de DNA. Chaque gène, ayant un contenu en base spécifique, aura un nombre de fragments spécifique si on décide de le "découper" à l'aide de l'enzyme. Si le gène A possède 2 fois la séquence GATC il donnera 3 fragments et si le gène B en possède 4 il donnera 5 fragments (et ainsi de suite). En utilisant un enzyme particulier on sait qu'on doit s'attendre à trouver une série précise de fragments de tailles déterminée. C'est la méthode du fingerprinting qui permet notamment de reconnaitre un gène.
Si une mutation intervient à cet endroit précis de reconnaissance de l'enzyme (par exemple un GTTC au lieu de GATC), il n'y aura plus de coupure, le gène B par exemple ne donnera que 4 fragment dont un sera beaucoup plus long. C'est ce qu'on appelle un RFLP ("restriction fragment lenght polymorphisme" ou en français polymorphisme de longueur des fragments de restriction)
Cette méthode permet de repérer des mutations. Dans une cellule saine on "découpe" un gène sain on obtiendra 4 fragments, si dans une cellule malade on "découpe" le même gène en obtenant cette fois ci 3 fragments on pourra se dire qu'il y a eu mutation, et que celle ci est peut être responsables de la maladie.
(bon j'ai simplifié)
Merci bien pour votre réponse, elle est à la fois simple et claire. Merci une autre fois.
salut,
"les cartes de restriction sont indépendantes de l'expression des génes". je ne compris pas cette phrase vue q'on peut connais s'il y avait une mutation d'aprés le RFLP
oui, mais la structure d'un gene ou la présence de mutations ne te donne aucune information sur son expression ! Une carte de restriction s'effectue sur l'ADN génomique, donc tu n'as pas d'information sur la traduction des gènes en ARN.
mm et RFLP est-elle realise sur les sequences codantes et non condantes n'est ce pas ?
Salut,
Meme si j'ai compris ce que tu as voulu dire, une analyse RFLP peut dans certains cas renseigner sur le niveau d'expression d'un gene. Il m'est deja arrive de faire des RFLP sur un promoteur a la recherche d'une mutation specifique qui rend le promoteur constitutif.Envoyé par Flyingbike
A+
ah oui je suis d'accord, mais dans ce cas meme cela ne te renseigne pas sur l'expression effective du gene a un instant T mais plus dans l'expression potentielle. Mais oui c'est un bon exemple en effet... Merci de la précision.
Bonjour , voila mon professeur a parler de creation artificiel de site de restriction dans la methode de RFLP .
Grace a un ordinateur qui pouvait reperer les possibilité d'abolition ou de creation de site de restriction sur une sequence d'ADN qu'on a rentre au prealable on pouvait en quelques sorte "triché" ...
Puis on utilise la PCR sur l'ADN genomique... Tout cela est flou dans ma tete , je ne vois pas comment cela marche .
Je sais pourtant comment une PCR marche . Le pire c'est que j'arrive meme a voir qui a l'ADN mutant et qui a l'ADN normal mais je ne vois pas comment on arrive a ce resultat .
Merci de m'eclairer
