Protocole de bloquage du cycle cellulaire

[invite37a064bd]

Bonjour !

Comme indiqué dans le titre, je suis à la recherche d'un protocole pour bloquer le cycle de mes cellules (CHO de ligné cellulaire)
J'aimerai les bloquer si possible aux différenttes phases du cycle ou elles se trouvent ( G0/G1, S, G2/M ). (les produits que j'ai a dispositions sont : demecolcémide, DMSO, colchicine, metastavine, ARA-C et hydroxy-urée. Mais je peux en avoir d'autres si besoin.)
Le mieux serait d'avoir un seul protocole pour les 3 phases (noté si dessus), mais un pour chaque irai aussi.

Merci beaucoup de votre réponse !
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[invite71f23525]

Bonjour,

L'hydroxyurée pour bloquer en phase S et la colchicine pour bloquer en G2/M. Par contre pour bloquer en G1/S, le mieux est une déprivation en sérum, qui augmentera la population cellulaire en G1.

Greg

[invite37a064bd]

Merci Greg...

Mais est-ce que tu aurai des protocoles qui vont avec tes conseils ? Parceque c'est la qu'est mon problème... je ne trouve pas de procédure pour effectuer mon analyse...

Gaelle

[invite71f23525]

Il faut chercher dans le Matériel et Méthodes des publies si tu as accès à bibliovie ou biblioinserm, sinon fais tes recherches dans Google Scholar où les résultats des recherches sont des liens vers des publications pour la plupart en accès libre.

Greg

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite37a064bd]

Ok ! Merci beaucoup ! J'irai voir ce que je peux trouver. Quand à bibliovie ou biblioinserm je ne sais pas si je peux y avoir acces, je vais demander.

Encore merci.

Gaelle

[invite30157012]

Un double blocage thymidine est aussi efficace pour bloquer les cellules en début de phase S, et le nocodazole peut être utilisé pour le blocage en G2/M. Ce sont d'autres agents souvent utilisés par rapport à ceux que tu as mentionné. Si tu as besoin de plus d'infos sur les protocoles, n'hésite pas amis tu peux effectivement retrouver ça facilement dans des publis. Pour la colchicine, je l'utiliseà 0.06µg/ml final dans le milieu pendant 2h, mais ce protocole me permet d'accumuler des métaphase pour faire karyotypes, pas pour synchroniser les cellules. Peut-être dans ce cas faut-il laisser plus longtemps la colchicine. Bon courage.

[invite37a064bd]

L'expérience n'ai pas fontionné aussi bien que je l'aurai penser. Je pense que le but était peut-eter un peu trop élévé.
Merci a tout ceux qui m'ont aidé dans mes recherches !

[invited9d41589]

Bonjour, oui je confirme

La thymidine (2mM) va entrainer une inhibition des ribonucleotides reductase qui transforme donc les nucletotides en adn et par conséquent bloque les cellules en phase S.
le second inhibiteur utilisé est le nocodazole (50ng/ml), lui va depolariser les microtubules, et bonc bloque les cellules en phase M.

Tu peux jouer sur l'ajout +/- serum lors de tes traitements, je pense que l'on trouve facilement des protoc sur le net

Cordialement