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Construire une carte de réstriction



  1. #1
    mydreamforever

    Construire une carte de réstriction


    ------

    Bonjour, j'ai un exercice à faire où je ne comprends vraiment rien.

    J'ai mis l'exercice en pièce jointe, je suis désolée de ne pas avoir au moins recopié l'énoncé mais aujourd'hui je manque de temps.

    Je ne sais pas du tout quelle est la marche à suivre pour répondre à la question posée, quelqu'un pourrait t-il m'éclairer?

    Je ne veux pas qu'on me fasse l'exercice, juste qu'on m'indique quelles sont les étapes à suivre.

    Merci beaucoup pour votre aide!

    -----
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  2. Publicité
  3. #2
    piwi

    Re : Construire une carte de réstriction

    Il n'y a pas réellement de méthode pour résoudre ce genre de problèmes. Il faut juste être un peu logique et procéder par étape. Un vrai bonheur.

    HindIII.
    Vous savez qu'il n'y a qu'un site dans le plasmide. Donc quand vous coupez avec HindIII vous linéarisez pBP. C'est ce que vous observez.
    Vous savez que vous insérez votre gène en HindIII. Votre fragment ne contient donc pas de site HindIII interne (logique). C'est ce que vous observez en coupant le clone 15. Deux fragments sont produits. En fait vous avec pBP d'un coté et l'insert de 2,5kb de l'autre. Joie!

    EcoRV
    pBP est linéarisé. Il y a donc un site de coupure unique dans le plasmide.
    Le clone 15 sort un fragment. C'est donc qu'il porte un second site de coupure et que ce site ne peut être apporté que par l'insert. Votre gène contient donc un site EcoRV

    HindIII + EcoRV
    En coupant pBP avec les deux enzymes vous sortez un fragment de 2kb. Donc les sites HindIII et EcoRV sont distants de 2kb.

    ---HindIII-------------EcoRV--------
    ---------------2kb

    Vous avez inséré votre gène.
    ---HindIII-------------------HindIII-------------EcoRV--------
    -------------insert 2,5kb--------------2kb

    Maintenant où se situe le site EcoRV dans votre insert?
    Vous savez que deux fragments de coupure sont dus au plasmide seul. Ce sont les fragments de 2Kb et de 3Kb. Il reste donc deux fragments issus de votre gène, ceux de 1Kb et de 1,5Kb
    -------EcoRV-----
    -1,5Kb-------1kb
    ---insert 2,5Kb

    A présent nous avons vu grâce à la coupure par EcoRV seul que les deux EcoRV dans le clone 15 sont distants de 4,5Kb. Cette information nous permet d'orienter notre gène dans le plasmide.

    ---HindIII-------EcoRV-----HindIII-------------EcoRV--------
    ----------1,5Kb-------1Kb------------2kb
    ------------------|--------------3Kb-------------|

    Voilà,
    Le but n'est pas de vous mâcher le travail mais de vous exposer une démarche pour progresser dans ce type d'exercices. J'espère vous y avoir aidé.

    Cordialement,
    piwi
    Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.

  4. #3
    xAngellex

    Re : Construire une carte de réstriction

    Bonjour Piwi, je sais que ce topic est vieux mais j'ai le même sujet et évidemment je bloque.. Et en lisant votre réponse, je ne comprends pas pourquoi "Vous savez que vous insérez votre gène en HindIII. Votre fragment ne contient donc pas de site HindIII interne (logique). " Pouvez vous m'expliquer ?
    En espérant avoir quand même une réponse..

  5. #4
    arkose

    Re : Construire une carte de réstriction

    On sait que le fragment est en HINDIII car cela est dans l'énnoncé de la question : "L'ADN génomique de la drozo est digéré par HINDIII et une banque est construite avec pBP1".
    Et lorsque l'on coupe le clone 15 avec l'enzyme on ressort uniquement l'insert pas un fragment en plus (donc pas de site de coupure dans l'insert). Voila ^^

  6. A voir en vidéo sur Futura
  7. #5
    xAngellex

    Re : Construire une carte de réstriction

    Wahou ! Merci pour la réponse si rapide =D Mais enfet, je n'ai pas eut de cours sur ce chapitre donc je suis un peu perdue.. Qu'est ce que signifie "une banque est construite avec pBP1" ? Et pourquoi dites-vous "Donc les sites HindIII et EcoRV sont distants de 2kb." Pour moi ils n'ont qu'1kb de distance.. (Je crois effectivement que je n'ai rien compris à ce "truck" ^^)

  8. #6
    arkose

    Re : Construire une carte de réstriction

    Une banque c-a-d tu prend ici la drozo tu coupe tout son génome avec HindIII tu va donc creer toute une série de fragment de tailles différentes. Tu coupe ton pBP1 avec la même enzyme qui ne coupe qu'une fois. Tu colle le tout et tu obtiens des clones différents (chacun à un fragment d'ADN de drozo de taille différent).
    Pq 2kb tu dois réfléchir de manière circulaire un plasmide c'est rond ^^
    Si tu coupe le plasmide vide (témoin) avec HindIII tu rend le plasmide linéaire ok ca te donne 5kb.
    Si tu coupe avec HindIII ET EcoRV tu as u fragment de 3 et un de 2 kb.
    En clair : oRV------------HindIII----------Ec
    _____________3kb_____________2kb
    Donc en réalisté les deux site sont soit à 2kb soit à 3kb mais jamais à 1kb de distance (Ec ORV pour représenter la circularité : c'est le même site).

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  10. #7
    xAngellex

    Re : Construire une carte de réstriction

    Aaaahhh !! Merci =D ! Bon puis pour le reste, je demanderai à mon prof après tout il est payé pour ça =p Merci beaucoup Arkose =)

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