Bonjour, je voudrait savoir s'il était possible d'intégrer un plasmide à une cellule eucaryote? D'après ce que j'ai trouvé sur le net, les seuls eucaryotes à posseder un plasmide sont les levures saccharomices cervisiae. Est-ce que ce sont vraiment les seules eucaryotes à avoir un plasmide? Et est-ce qu'un eucaryote qui n'a habituellement pas de plasmide pourrait en incorporer un et le rendre fonctionnel?
Bonjour,
Normalement oui tu mettre des plasmides dans des cellules eucaryotes puisque quand j'étais en stage on avait transplanté des plasmide à l'intérieur de cellules cancéreuse. Il s'uffit de faire une électroporation ou autre manipulation du genre pour qu'il soit intégré.
Par contre je ne sait pas si il existe d'autres eucaryotes qui possèdent naturellement un plasmide.
la transfection de cellules eucaryotes est possible. Par lipofection, éléctro, microbalistique etc ...Par contre contrairement au bactérie va se poser le problème de réplication. Car le plasmide n'est pas au réplicome dans les cellules eucaryotes supérieur. Donc en gros tu aura une expression stable grâce à une intégration, ou une expression transitoire (3-4 jours max) sans intégration du plasmide dans le génome de la cellule.
Bonjour,
Des séquences contenues au sein d'un plasmide peuvent s'intégrer par recombinaison homologue dans l'ADN génomique d'une cellule eucaryote. Ce procédé peut être réalisé avec une transfection classique suivie d'étapes de sélection (G418 le plus souvent) sur plusieurs semaines pour sélectionner les clones stables : on parle alors de transfection stable.
Les levures peuvent posséder des structures moléculaires semblable à des plasmides, qui reste en périphérie du noyau, sont répliquées, on les appelle les épisomes (j'espère ne pas me tromper, ça fait un moment que je n'ai pas vu de levuresà part dans ma machine à pain
).
Dans ta dernière question, je suppose que tu suggère d'intégrer un plasmide dans une cellule eucaryote et de le garder en tant que tel, c'est à dire qu'il ne s'intègre pas au génome. Je pense que c'est possible de façon "spontanée" chez S. Cerevisiae. Pour des cellules de mammifères, cela nécessite qu'elles soient au préalable transformées avec l'antigène T de SV40, comme c'est le cas pour les cellules Cos-7. Cet antigène permet au plasmide d'être répliqué par la cellule, et donc d'être conservé pendant une période plus longue. Sauf exception, la présence de cet antigène est absolument nécessaire dans les cellules de mammifères pour qu'il y ait réplication d'un plasmide.
Greg
Dernière modification par LXR ; 19/02/2009 à 00h35.
Never give up.
Ok merci. Et la recombinaison homologue comment ca marche? Ca se fait naturellement ou y'a besoin d'enzymes ou autres molécules? J'aimerais bien aussi savoir comment on intègre le plasmide (lipofection, electro, microbalistique, comment ca marche?)?
Salut
Juste une précision, beaucoup d'eucaryotes ont naturellement des plasmides. Certes dans la mito mais ce sont des plasmides (souvent linéaire d'ailleurs). Il n'y a donc pas que cerevisiae.
Bonne journée
Dans la mitochondrie c'est pas des plasmides. C'est de l'ADN mitochondriale, on suppose même que les mitochondries étaient des bactéries à l'origine qui sont rentrées dans des cellules eucaryotes.
Non non, je parle bien des plasmides mitochondriaux et pas de l'ADN mitochondrial (qui peut être linéaire ou circulaire).
Ils sont répandus et dans une grande variété d'organismes différents (protistes, plantes, champi, placo).
Il porte quels genres de gènes ????
dna pol, rna pol, pour la plupart les deux en même temps mais pas toujours.
En plus y a des petites ORF dans les extrémités , on pense que ça code pour la protéine qui a été montrée comme fixée en 5' du plasmide. Elle permettrait d'initier la réplication, mais rien n'est montré.
Une protéine qui fait du capping? Un peu sur le modèle des ARNm?
. Je n'ai pas trop suivi l'affaire mais il y a quelques années il était dans l'air que même les génomes eucaryotes prenaient une conformation pseudo circulaire en faisant des boucles ancrées sur la membrane nucléaire.
Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
la protéine serait liée à l'ADN linéaire à l'extrémité et elle permettrait d'initier la réplication avec un groupement OH. Je me demande si ça marche pas un peu comme ça chez certains virus, je me rappelle plus très bien.
Bonjour
Dans la même idée, j'aimerais savoir si lors de vectorisation chimique ( DEAE dextran, phosphatede calcium ou liposomes) ou physique ( bioloistique, electroporation) l'ADN inséré devait être un plasmide ?
imaginons que je veuille étudier une protéine tagguée ou un promoteur a l'aide d'un gène reporteur, dois-je obligatoirement utiliser un plasmide pr transfecter ma cellule par lipofection ou biolistique ?
merci
