dosage enzyme pour quoi utiliser le bain-marie ?

[invitee7b29f0a]

Bonjour,
Je veux doser une enzyme dans un tissu. J’ai le protocole de travail. Mais je n’arrive pas à comprendre deux choses.
1- Pour la préparation du tissu dans le tampon, on dit qu’il faut travailler dans la glace (4C°). Pour quoi broyer le tissus+tampon dans la glace ? Pour quoi le centrifuger à (4C°) ? Après la centrifugation, est ce qu’on doit remettre le tube dans le froid, jusqu’à la provocation de la réaction dans l’étuve du spectrophotomètre ?


2- Il y a une phrase qui dit qu'il faut mettre les solutions préparées au bain-marie (25 C°). Quel est l’effet de cette température ? Quelle rôle joue t’elle dans la procédure du dosage ?
Merci beaucoup.
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[invitec38e3ca5]

Bonjour!
Ne serait-ce pas une façon de vérifier les effets de la température sur l'activité de l'enzyme?

[invite7249a892]

Hello à tous;
Je pense que pour la préparation du tissu dans le tampon, on dit qu’il faut travailler dans la glace 4C°,c’est pour inactiver l’enzyme(par le froid) et éviter l’augmentation de la température du tissu lors du broyage et de ce fait éviter la dénaturation de l’enzyme, car une enzyme soumise a basse température est inactivé mais elle n’est pas dénaturée (et qui est donc de ce fait détruite comme dans le cas d’une haute température).
Et c’est la même chose pour la centrifugation.
On met les solutions préparées au bain-marie (25 C°) certainement pour réactiver l’enzyme inactivé par le froid et de ce fait elle redevient active, ce qui permet d’effectué le dosage.
J’espère que j’ai été assez claire dans mes explications.
Cordialement,
Katie.

[invite44c2d7cd]

Bonjour,
je crois que c'est pour travailler à une température donné pour pouvoir comparer ses résultats avec les normes ou d'autres résultats d'autres laboratoire, les conditions standards donc!

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite853321bf]

Une enzyme comme le dit Katie20012 a une activité lié à la température.
Soit on veut empêcher que l'enzyme soit active durant la phase de préparation (car ainsi il n'y a aucun produit de formé, toute l'activité que tu verras par augmentation de l'absorbance sera du à des réaction se produisant à ce moment là), soit il y a d'autres enzymes ou inhibiteurs de ton enzyme dans l'échantillon qui pourrait dégrader ton enzyme d'intérêt.
Mais je pencherais plus pour la première solution quand même