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Mutagénèse dirigée



  1. #1
    Bacillus 100

    Mutagénèse dirigée


    ------

    Bonjour,
    J'aimerais déleter une région d'environ 30 pb sur mon gène.
    J'ai à ma possession le kit de mutagènese de chez stratagene que j'ai déjà utiliser mais pour muter une seule base, pensez-vous que ce kit permettrais de déleter une région aussi grande de 30pb ou bien existe-il d'autres moyen plus efficaces ?

    Merci pour vos réponses

    -----

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  3. #2
    Yoyo

    Re : Mutagénèse dirigée

    salut

    Oui ce kit permet de le faire, le tout est de bien dessiner tes oligos pour la délétion. Sinon une simple PCR avec des amorces tetes beches séparées de 30nt produira le meme résultat (sauf qu'il faudra phosphoryler avant de liguer).

    YOyo

  4. #3
    Bacillus 100

    Re : Mutagénèse dirigée

    Ok je vais donc dessiner une amorce prendre les 15 bases avant ma délétion plus les 15 bases aprés et op je m'embarque dans la mutagénèse.
    Je vous tiens au courant pour les résultats

    Merci

  5. #4
    Bacillus 100

    Re : Mutagénèse dirigée

    Coucou,
    me voila avec des nouvelles!
    et bien la mutagénèse ne marche pas pour une délétion aussi grande!
    J'ai essayée pour une délétion de 3 nucléotides sa fonctionne trés bien par contre pour une grande délétion (environ 30 nucléotides) j'ai testé 7 colonies et aucune n'est positives je n'ai que de l'ADN parental non muté!!

    Il faut que je me dirige vers une autre stratégie
    Quelqu'un à une idée?

  6. #5
    gorben

    Re : Mutagénèse dirigée

    Salut,

    Tu peux essayer cette methode : Ici ou celle la.

    A+

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    Bacillus 100

    Re : Mutagénèse dirigée

    Nous n'avons pas vrairment d'experience pour réaliser ce genre d'expérience de recombinaison dans notre labo
    Merci

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  10. #7
    gorben

    Re : Mutagénèse dirigée

    Salut,

    Pas besoin d'experience, suffit de demander les souches aux auteurs des 2 articles (qui vont les envoyer ) et apres, c'est de la cuisine...

    A+

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