électrophorèse
bonjour,
j'ai un petit problème
en fait, j'ai fait une électrophorèse, et pour un mélange de protéines, je n'ai aucune bande qui apparaît,
qu'est ce qu'il aurait pu ce passer?? (je n'ai pas oublié de mettre le colorant nécessaire)
merci de m'aider parce que j'en n'ai vraiment aucune idée...
Salut,
La concentration du gel été peut-être fausse et les proteine on migré plus vite que prévu et son sorti du gel.
La concentrations des proteines pouvaient être trop faible se qui fait qu'elle sont bien la mais pas visible même avec le colorant.
Solution contaminé par des protéase !
Enfin bon il peut y avoir 10 000 raisons mais si vraiment y'a pas de bande c'est très surment que y'as pas de proteine !
désolé pour toi
cordialement
Bonjour,
le mieux serait que vous nous donniez le protocole que vous avez utilisé en précisant effectivement quelle quantité de protéines vous avez déposée.
Avez-vous mis un marqueur de poids moléculaire? A-t-il migré correctement?
Cordialement
merci
ah ok alors, je pense que je vois où est le problème
en fait, quand j'ai déposé mon échantillon dans le puit, je voulais expulser au maximum le contenu de la pipette, ce qui a provoqué un reflu, y a une quantité non négligeable qui est donc sortie du puit, donc c'est que la quantité était trop faible pour être visible?
mais ce que je trouve étrange, c'est qu'on ne voit vraiment mais vraiment rien
en tout cas, le problème ne vient pas du gel puisque les échantillons que j'ai déposés dans les autres puits ont tous migrés correctement ; il ne vient non plus d'une contamination par protéase puisque les autres échantillons qui ont migrés correctement provenait du même mélange (c'est en fait des lavages provenant d'une même colonne chromatographique)
qu'en pensez-vous?
merci
Re : électrophorèse
Salut,Envoyé par descmarc
La concentration du gel était peut-être fausse et les protéines ont migré plus vite que prévu et sont sorties du gel.
La concentration des protéines pouvait être trop faible ce qui fait qu'elles sont bien là mais pas visibles même avec le colorant.
Solution contaminée par des protéases !
Enfin bon il peut y avoir 10 000 raisons mais si vraiment il n’y a pas de bande c'est très sûrement qu’il n’y a pas des protéines !
Désolé pour toi
Cordialement
Une explication rationnelle ; dommage que notre belle langue soit si mal traitée.
Bonjour,
Oui c'est possible que ça vienne de là. Ce qui est possible aussi, c'est que vous ayez contaminé les autres puits (que les protéines que vous avez disséminé lors du pipetage se retrouvent dans les autres puits). A votre place, je recommencerai la manip pour être certain du résultat.en fait, quand j'ai déposé mon échantillon dans le puit, je voulais expulser au maximum le contenu de la pipette, ce qui a provoqué un reflu, y a une quantité non négligeable qui est donc sortie du puit, donc c'est que la quantité était trop faible pour être visible?
mais ce que je trouve étrange, c'est qu'on ne voit vraiment mais vraiment rien
Question bête mais bon: concernant votre échantillon: êtes-vous sûr qu'il y avait des protéines? Avez-vous fait un dosage? Peut être que l'élution sur la colonne chromatographique n'a rien donnée?
Cordialement
Oui, j'ai fait un dosage et il y avait bien des protéines
merci pour les explications
