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estimation de le concentration d'ADN aprés spectrophotometrie



  1. #1
    hanaeuh

    estimation de le concentration d'ADN aprés spectrophotometrie

    Bonsoir, au cours de mon stage à la faculté, j'ai fais des extractions d'ADN à partir de sang humain, et aujourd'hui j'ai dosé mes echantillon par spectrophotometrie (ADN dilué au 1/100 dans du TE). Je voudrais calculer la concentration de mon ADN dans chaque echantillon, comment puis je faire à part la regle de: 1 DO correspond à 50 µg/ml.
    Je voudrais y prosseder par le coefficient d'extinction, pouvez vous m'eclairer plus sur ce sujet et me donner la formile à utiliser si possible.
    Merci.

    -----

    « Rien ne se perd, rien ne se crée, tout se transforme »

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  3. #2
    yumyum031

    Re : estimation de le concentration d'ADN aprés spectrophotometrie

    Bonjour,
    Dans mon cours de Biologie Moleculaire on utilise cette formule: [ADN]= Absorbance à 260 nm* facteur de dilution* 50ug/ml ( pour l'ARN c'est 40ug/ml)
    [ADN] est en ug/ml.
    Je sais pas si elle s'applique pour ce que vous voulez faire ^^

    Cordialement.

  4. #3
    Getsuga_Tensho

    Re : estimation de le concentration d'ADN aprés spectrophotometrie

    Bonjour,
    Je voudrais appliquer la formule de yumyum (plus haut) sur 2 µl d'ADN dilué dans 998µl d'eau distillé (le tout donne 1000µl), comment doit-je appliquer la règle précédemment cité si je veux trouver la concentration de ma solution en ADN ?

    Merci.
    Dernière modification par Getsuga_Tensho ; 27/02/2012 à 14h48.

  5. #4
    kamor

    Re : estimation de le concentration d'ADN aprés spectrophotometrie

    Et bien... en l'appliquant
    Tu fais ta mesure, tu multiplies par 50 puis, tu auras ainsi la concentration dans ta cuve spectro. Pour l'avoir dans ton tube, tu multiplies par ton facteur de dilution (énorme d'ailleurs)

  6. #5
    Getsuga_Tensho

    Re : estimation de le concentration d'ADN aprés spectrophotometrie

    C'est justement l'énormité de mon facteur de dilution qui m'a mis dans le doute lol Merci de me l'avoir fait remarqué

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    kamor

    Re : estimation de le concentration d'ADN aprés spectrophotometrie

    Si tu as effectivement fait cette dilution, tu as un fort risque de te retrouver avec un DO très faible (voire nulle) et donc la relation ne peut être établie

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