Extraction ARN AGPC et phénol/Chloroforme

[invitec867c46b]

Bonjour !
Dans mes comptes-rendu de TP je dois présenter mon extraction d'ARN avec la méthode Guanidio-thiocyanate puis plus loin expliquer les autres méthodes d'extraction envisageables...
Mais quelle est la différence entre une extraction à l'AGPC et une au phénol/chloroforme ? Ces deux substances servent à la purification non ? Et dans une AGPC on utilise aussi du phénol et du chloroforme...
Merci beaucoup d'avance de votre aide !
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[invitec867c46b]

Personne ne peut m'aider ?? Parce que je cherche...mais je ne trouve vraiment pas...

[invite41082aa8]

Bonsoir,
je pense avoir la réponse à ta question, en espérant que ce n'est pas trop tard...
la GT est un sel inhibiteur puissant de RNases. Elle empèche donc que les ARN que l'on cherche à purifier soit dégradés, alors que dans la méthode au phénol chloroforme seul, il faut porter des gants et autoclaver tout le matériel pour éviter de faire entrer des RNases avec nos ARN. La GT est aussi un agent dénaturant et dissociant pour éviter la contamination de notre solution par de l'ADN.
voila voila, j'epsère qu'il est pas trop tard pour ton compte rendu..

[invite0e9887ab]

Bonsoir,
je pense avoir la réponse à ta question, en espérant que ce n'est pas trop tard...
la GT est un sel inhibiteur puissant de RNases. Elle empèche donc que les ARN que l'on cherche à purifier soit dégradés, alors que dans la méthode au phénol chloroforme seul, il faut porter des gants et autoclaver tout le matériel pour éviter de faire entrer des RNases avec nos ARN. La GT est aussi un agent dénaturant et dissociant pour éviter la contamination de notre solution par de l'ADN.
voila voila, j'epsère qu'il est pas trop tard pour ton compte rendu..

Bonsoir,


J'ai toujours eu le sentiment que l'extraction au phenol/chloro, le port des gants, l'autoclave, etc. était une procédure courant pour l'extraction d'ARN. Si la GT possède de tels avantages, pourquoi ne pas l'utiliser systématiquement ? Ou peut-être est-ce le cas et je ne m'en suis pas rendu compte? Je ne suis vraiment pas une experte dans le domaine.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite41082aa8]

oui bonne question, je n'en ai aucune idée... Cela dit, tu as fait en TP la méthode à l'AGPC, moi aussi... C'est sûrement la plus utilisées quand même!
Ah puis tiens! je viens de voir une autre différence, sûrement la plus importante même : la méthode AGPC permet d'extraire les ARNtotaux en une seule étape alors qu'avec la méthode PC il fallait faire précipiter avec du chlorure de lithium. Là on utilise 2 sels : le citrate de Na et l'acétate de Na que l'on met directement dans notre solution ! je pense que c'est plus ca la réponse à ta question

[invite0e9887ab]

He bien en fait non, moi, je n'ai pas fait cela aux TP (tu as dû confondre les pseudos ).
Mais j'ai bien l'impression que la méthode à l'AGPC est plus pratique. J'y penserai lors de ma prochaine extraction.

Merci pour les explications !

[inviteb6144ea4]

Bonsoir,

dans de nombreux kit d'extraction d'ARN sur colonne (je ne citerai pas de marque ), le thiocyanate de guanidium est ce qui est le plus utilisé. Notamment pour la grande pureté des échantillons qu'il permet d'obtenir.

Cordialement