Lecture Sequence ADN et WB

[invite5b66631c]

Bonjour tout le monde, en pleine periode de revision et plein d'interrogations ^^

-Premierement j'ai un doute concernant la lecture de sequence d'ADN, par exemple j'ai: ACTTCGTAG.. et ACTTCTAG..
Si on considère les codons est-ce que mes 2 codons stop sont valable c'est a dire que quelque soit mon codon, le codon stop est "prioritaire" je m'explique:
on aurait alors les codons ACT TTC TAG et ACT TC TAG ou que le premier est valable ?
Cela s'appliquerai alors également pour les ATG (debut traduction) ?

- Je veux trouver la longueur en Nucléotide d'un ARNm (mature) à partir d'un ADNg(genomique)
Dois-je prendre pour fin de sequence le site de coupure (AATAA) ou le signal de polyadenylation(sequence?)

-Enfin pour un Western Blot je n'arrive pas à "visualiser" lorsque sur les "pistes" on a les sigles IP(immunoprecipitation) et WB, par exemple:
IP=DCC(recepteur) et WB=p-Y(kinase)
Cela voudrait que je dirige mon AC monoclonal contre DCC et le Poloclonal sur la P-Y?

Merci de pouvoir me répondre!
-----

[invite71f23525]

Bonjour,

- Première question : si on considère que la première base du premier codon est A, on a alors : ACT TTC TAG et ACT TCT AGX (où X est A, G, T ou C). Dans la première séquence TAG est un codon stop, dans la deuxième séquence, le dernier codon commence par AG et aucun codon stop ne commence par AG donc il n'y en a pas. Vous n'avez pas le droit de créer un codon à 2 bases comme vous l'avez fait. Un codon est toujours composé de 3 bases.

- Deuxième question : Cela dépend des éléments à votre disposition. En plus de connaitre le site de polyadénylation (qui ne vous donnera pas la taille exacte de l'ARNm puisqu'il y a ajout de la queue polyA de longueur variable), il faut connaitre le point +1 et la longueur des exons. Dans la pratique on ne s'embête pas on va sur une base de données où figurent les séquences des ARNm matures.

- Troisième question : l'IP vous dit quelle protéine on a immunoprécipité (ici DCC est immunoprécipitée), et WB vous dit quelle protéine a été marquée en western blot (ici p-y kinase). On utilise un anticorps polyclonal pour les immunoprécipitations et pour le western blot, si on détecte une autre protéine que celle immunoprécipitée, on utilise soit un monoclonal soit un polyclonal. Donc ici on aurait polyclonal pour DCC, monoclonal ou polyclonal pour p-y kinase.

Greg

[invite5b66631c]

Merci d'avoir répondu c'est plus clair pour les 2 premieres cependant pour la question sur le Western Blot ce que je n'arrive pas à comprendre les indications de l'experience et donc comment peut on avoir une bande caracteristique pour cet exemple et déduire par exemple qu'un produit X qu'on a rajouter induit la Phosporylation de DCC(recepteur)(en comparaison des intensités des bandes par ex)
IP serait ce que l'on veut étudier
WB ce qui permet de reveler ?
j'espère que j'arrive a être comprehensible, cela serait tellement mieux avec la figure sous les yeux :/

[invite71f23525]

En IP, on "attrape" DCC. Si p-y kinase est attachée à DCC, on la voit en WB, si elle n'est pas attachée à DCC, on ne la voit pas, c'est aussi simple que ça.

Greg

Edit : par contre je ne comprend pas pourquoi vous parler de phosphorylation, cela doit avoir un rapport avec votre énoncé. Si vous n'arrivez toujours pas à comprendre, essayez d'écrire votre énoncé ou de le scanner et poster l'image dans votre prochain message.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite5b66631c]

Ui c'est par rapport à l'éconcé mais merci à toi c'est plus clair à présent, c'est tellement plus simple quand c'est expliquer avec des mots non scientifique parfois