Quels sont les causes des smires dans les produits PCR?

[invite7b808616]

Quels sont les causes des smires dans les produits PCR?

J'ai envie de dire tout est dans le titre...
Mais plus sérieusement, j'ai déjà réalisé pas mal de PCR sans avoir de problèmes de smires mais là je coince. Je suis sensée fournir des images publiables mais j'ai des smires qui gache tout.

Savez vous m'énoncer les causes de ceux-ci?

Moi je connais:
-la dégradation de l'ADN (mais normalement là je suis à l'abris... enfin je croyais)
-Trop d'ADN génomique dans l'échantillon ( normalement c'est ok, j'ai déjà fait avec ces mêmes quantités sans problème)

Quels sont les autres risques?
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[Yoyo]

salut

je dirais qu'un temps d'élongation trop courts donne aussi des smear, ou alors trop de cycles de PCR, ou encore des hybridations aspécifiques...
Sinon, j'ai deja vue des smear causés par les sels.

YOyo

[invite7b808616]

J'ai en effet diminué mon temps d'élongation...
Mais il reste de 40 sec pour l'amplification de 150pb à l'aide de la Taq polymérase de "thermoscientific"

... à tester

Autre idée?

[Yoyo]

J'ai en effet diminué mon temps d'élongation...
Mais il reste de 40 sec pour l'amplification de 150pb à l'aide de la Taq polymérase de "thermoscientific"

... à tester

Autre idée?

pour 150pb 10s devraient largement suffir!

YOyo

[A voir en vidéo sur Futura]