Problème d'amplification de gènes bactériens

[invite56b7fcda]

Salut.
Dans mes travaux je dois amplifier des genes d'interets du genomes de plusieurs bacteries. Mais je n'arrive pas a amplifier ces genes, des bacteries individuellement. Mais lorsque je met ensemble tous les ADN de mes bacteries j'ai des amplification apres PCR. Je me demande si les fragments que j'obtient sont specifiques aux genes que je veux. Parceque je veux etudier la diversite de ces genes en faisant des transformations. Donc faut que je sois sur que ce sont mes genes que j'ai amplifie.
Je me fais comprendre j'espere. Si quelqun peut m'eclairer ce sera vraiment gentille.
Merci

Merci de mettre un titre explicite la prochaine fois, comme le demande la Charte

LXR
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[LXR]

Bonjour et bienvenue sur Futura,

Les causes peuvent être nombreuses...Qu'avez-vous essayé de faire pour résoudre ce problème? Quelle différence y a-t-il au niveau du protocole entre l'amplification avec un seul type d'ADN bactérien et plusieurs types d'ADN bactériens, hormis la quantité d'espèces d'ADN bactérien différent dans le mélange bien entendu? Mettez-vous plus d'ADN dans un cas que dans l'autre?

Greg

[invite56b7fcda]

Merci pour cette reponse aussi rapide.
J'utilise les memes quantites d'ADN dans les deux cas. C'est vrai que l'orsque je melange tous les ADN bacterien j'ai un materiel vraiment concentre. Mais j'ai fait les dilutions necessaire avant PCR.

[LXR]

Le problème est que même si le produit obtenu est spécifique, vous n'aurez aucun moyen de séparer le produit provenant d'un gène ou de l'autre, dans le cas où les différents produits font sensiblement la même taille. Essayez d'augmenter la quantité de matrice, ou de prendre d'autres amorces si cela est possible et revenez nous voir si ça ne marche toujours pas.

Greg

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite56b7fcda]

Ok merci. Je vais essayer d'amplifier mes genes avec d'autres amorces.
Merci encore.A bientot.