je veux isoler et trier une population cellulaire par cytométrie de flux quels sont les paramlètres techniques qui peuvent influencer le rendement la pureté et le debit.
2 eme question: pour interpréter un histogramme j'aurais besoin des valeur standard que l'on rencontre en phase G1 G2 S en %
La formule du ratio.....
merci je trouve pas grand chose sur internet! j'espere que vous pourriez m'aider
Bonjour,
Pour le débit, le paramètre essentiel va être la taille (le diamètre) des cellules que vous voulez trier et éventuellement si les cellules sont adhérentes ou pas.
Le diamètre des cellules oblige a utiliser un diametre de buse particulier.
On a la relation très simple qui dit qu`il faut utiliser une buse de diamètre de l`ordre de 5 fois la taille des cellules. Par exemple des lymphos passeront très bien sur une buse de 70 microns.
Par contre des megacaryocytes (grosses cellules) ne "passeront" pas sur ce type de buse.
Ensuite, la taille de la buse influence directement sur la vitesse de tri. Plus la buse est grande (90,100 microns) moins la vitesse de tri est rapide. En gros avec une buse de 100 microns vous trierez environ 10-20 millions de cellules par heure et avec une buse de 70 microns vous pourrez passer de l`ordre de 60-80 millions de cellules par heure.
La pureté ne devrait pas poser de problèmes sur une machine correctement utilisée (respect des tailles de buses en fonction des cellules et de la vitesse de tri en fonction de la buse).
Le rendement, c`est plus compliqué. Il va dépendre de vos cellules (cellules fragiles ou pas), du liquide de gaine utilisé, si le trieur garde au froid ou pas les cellules, de la durée du tri ect...
Par contre, pour récolter vos cellules, vous pouvez utiliser des tubes avec du milieu de culture et bien coater les bords du tube avec le milieu.
voila quelques indices pour le tri.
cordialement
