Extraction ARN
Bonjour,
j'ai testé plusieurs protocole d'extraction d'ARN (kit RNeasy, Chang et Al 1993, Reid et Al 2006) mais je n'obtiens pas un grand rendement (200ng/uL et en faisant 8 répliquat par échantillons j'obtiens au mieux 10ug...) Il m'en faudrais bien plus car après je dois synthétiser des cDNA et là il me faut 100 ng minimum d'ARNm. (10ug d'ARNt--> on perd 100 fois en ARNm--> 100ng ARNm en tout dans le tube)
Quelqu'un peut il m'aider?
Merci,
Salut et bienvenu,
Sans préciser à partir de quoi, personne ne pourra grand-chose pour toi...
Dslée j'oubliais détail important!! A partir de feuille, tige et racine d'arbre d'espèces tropicale!!
Au début du protocole de chang et Al, on doit incuber 10-15 min à 65°C, peut etre faut -il incuber plus longtemps, 30-45min ? (je reste sur ce protocole car kit presque épuisé, et protocole de la vigne= Reid et Al =contamination ADN avec un traitement à la DNAse...)
Sinon, j'ai de bons rapport de DO 260/280 ~2 et 260/230 aussi. Le seul soucis c'est que pour 2g de tissu je n'ai que 10ug d'ARN...
