ADNc simple, double brins et PCR

[invitea069fc56]

Quand on fait une réaction RT (reverse transcriptase) à partir des RNA totaux, on va synthétiser de l'ADNcun simple brin.
En utilisant cet ADNc dans une réaction PCR classique, avec tous les composants de la réaction (tampon, MgCl, dNTP, Taq, 2 oligo spécifiques..) on peut amplifier un fragment "double brin".
Ce qui m'échappe un peu, c'est à quel moment se fait la synthèse de deuxième brin de l'ADNc et comment la Taq "décide" ou "sait" qu'il manque un deuxième brin qu'il faut synthétiser avant de procéder à l'amplification du fragment délimité par 2 amorces présent dans la réaction?

Autrement dit, dans une réaction PCR classique et à partir d'ADNc simple brin, la Taq synthèsera d'abord le deuxième brin d'ADNc avant d'amplifier le fragment délimité par un couple d'amorces utilisés dans cette réaction? Ou bien, une fois qu'on a la Taq, elle prend l'ADN (simple ou double brin) comme matrice pour synthétiser un autre brin et ainsi de suite?

Merci pour vos réponses
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[invite71f23525]

Bonjour,

Je ne comprends pas bien ton blocage étant donné que tu sembles avoir compris le principe de la PCR. ADN simple brin ou double brin, cela ne change presque rien pour la PCR, hormis le fait que la première amplification aura lieu sur une seule séquence d'ADN, alors qu'avec de l'ADN double brin on en a deux : une séquence d'ADN et sa séquence complémentaire. A partir de la deuxième amplification, on a deux séquences d'ADN qui sont amplifiées, on est alors dans le schéma "classique" de la PCR.

Greg

[invitea069fc56]

Bonjour,

Je ne comprends pas bien ton blocage étant donné que tu sembles avoir compris le principe de la PCR. ADN simple brin ou double brin, cela ne change presque rien pour la PCR, hormis le fait que la première amplification aura lieu sur une seule séquence d'ADN, alors qu'avec de l'ADN double brin on en a deux : une séquence d'ADN et sa séquence complémentaire. A partir de la deuxième amplification, on a deux séquences d'ADN qui sont amplifiées, on est alors dans le schéma "classique" de la PCR.

Greg

Merci LXR, en effet, c'est comme tu dis !
Je viens de voir ça sur un schema et c'est claire maintenant pour moi !

Merci encore et bonne journée