Bonjour,
J'aimerai savoir ce que sa veut dire quand on nous dit qu'un oligonucléotide (moins de 50 nucléotides, sa je sais ^^) correspond à 20 ou 30 mer ???
Si 30 mer = 100 acides aminés (tiré de mon cours)
Je pensais que 1 mer = un nucléotide, mais d'après ce qui a été dit au dessus, je pense me tromper...
Merci d'avance !
Re bonjour,
J'aurai une autre question, tout aussi courte (tant qu'à faire, désolé je suis curieux de savoir, et internet ne donne quasiment rien a ce sujet) :
Que veux dire le terme : criblage, comme par exemple : criblage d'une banque génomique (ce n'est qu'un exemple)
Encore merci !
20 ou 30mer ça veut dire 20 ou 30 nucléotides, personnellement je trouve cette dénomination très moche (franglais brutal), mais bon ça existe.
Le criblage te permet de retrouver ta séquence d'intérêt dans une banque. En effet une banque est très vaste (environ 3000 clones pour couvrir le génome de E. coli et presque 100 000 pour couvrir le génome de D. melanogaster) donc on a besoin d'une méthode qui identifie en une seule fois le ou les clones qui portent la séquence d'intérêt.
Une méthode simple de criblage est l'hybridation sur membrane avec une sonde radioactive. Par exemple, si tu as réalisé ta banque par clonage avec des plasmides chez E. coli, tu fais une réplique des boîtes de Petri contenant la banque sur une membrane de nitrocellulose, tu soumets la membrane à l'action de la soude (qui lyse les bactéries et dénature l'ADN), ensuite tu incube la membrane avec une sonde radioactive complémentaire de ta séquence d'intérêt, puis tu révèles par autoradiographie.
Tu peux ainsi remonter au clone de ta banque qui contient le gène d'intérêt et travailler sur la séquence clonée.
à lire: Biologie moléculaire de la cellule par Lodish et al. ou Alberts et al. (ya des chapitres sur le génie génétique qui traitent des banques d'ADN)
Hello,
Merci beaucoup pour tes réponses
Donc si je résume, le criblage d'une banque me permet de retrouver la sequence du gène d'intérêt, par exemple par marche chromosomique ou comme tu viens de le dire par hybridation.
J'ai une question un peu bête, mais je préfère la poser : au début je m'imaginais qu'un clone c'est un peu comme dans star wars, copie exacte, mais en biotechnologie, cette definition me semble un peu décalée
Merci et bon week end
En bio moléculaire, on parle de clones souvent pour parler de gènes. En gros on a un gène lambda, on l'insère dans un vecteur (grosso modo un ADN avec des gènes " de machinerie d'expression" ) et ensuite on insère ledit vecteur dans une bactérie pour faire multiplier le gène, par les divisions cellulaires successives, les cellules bactériennes issues de la même cellule mère étant sur le papier, identiques.
On obtient donc des clones de gènes.
Merci pour ta réponse,
En résumé, une famille de clone dérive toujours du même gène, et ont par conséquent les mêmes séquences d'ADN. Or... on nous dit qu'avec des milliers (ou millions) de clones, on peut créer la banque génomique, et grâce à cette banque, reconstruire le génome complet d'un individu. Mais... si ces milliers de clones dérivent tous du même gène, on aura juste ce fragment de gène en milliers d'exemplaires, non pas tous les gènes ! A moins d'avoir des milliers de clones différents, et ceux en plusieurs exemplaires pour pouvoir réaliser la méthode de séquençage de Sanger (nécessité de pleins de clones identiques) pour pouvoir reconstituer les séquences au nucléotide près. Est-ce exact ?
Merci !
Dans une banque tu as de nombreux clones différents. Ceux identiques sont ceux qui forment une colonie (=un clone) sur ta boîte (car il faut des millions de bactéries pour former quelque chose de visible à l'oeil nu). Sur une boîte de Petri tu peux avoir des centaines de colonies qui correspondent à un fragment d'ADN unique au sein de la banque. Voilà comment tu peux couvrir un génome entier.
Hello,Envoyé par thejohnou
Donc je pense que ta réponse confirme mes dires (réponse précédente). Confirmation possible ?
Merci !! =)
