Rt-pcr
Bonsoir,
Pour moi, la RT-PCR consistait à changer l'ARN en ADNc puis à augmenter la quantité de ce dernier. Mais, en cours j'ai noté que la RT-PCR permettait "d'affirmer la présence ou l'absence de l'ARN" ce qui me paraît stupide puisque pour la faire, il faut bien un ARN!! Donc, quelle est l'utilité d'une RT-PCR ?
Merci.
Ton prof voulait probablement dire qu'a l'issue d'une reverse-transcription (RT) suivie de PCR: si le résultat est négatif, a priori c'est qu'il n'y a pas d'ARN et il est positif que s'il y en a (sous réserve d'un contrôle ou l'on amplifie l'échantillon sans passer par RT, pour vérifier l'absence d'ADN dans la préparation avant la RT)Envoyé par Babarrrrr
La rt-PCR est une des techniques pour détecter la présence ou l'absence d'un messager particulier. En effet les ARN sont présents en petite quantité et ne sont pas facilement détectables ni quantifiables de façon spécifique (sauf hybridation par sondes, etc...). Pour détecter ou quantifier un messager particulier, il faut donc l'amplifier par PCR (quantitative, semi quantitative ou classique).
Malheureusement les enzymes utilisées en PCR ne sont pas capables de prendre comme matrice un brin d'ARN. La solution est donc d'utiliser une enzyme qui synthétise un brin d'ADN complémentaire de ton ARN, ce brin pouvant ensuite etre utilisé comme matrice pour l'amplification.
Pour résumer, tu peux utiliser la RT-PCR pour détecter indirectement la présence d'un ARN. Attention toutefois, tu ne peux conclure a l'absence de ton messager qu'en ayant fait un contrôle positif te permettant de discriminer entre l'absence de messager et le non fonctionnement de l'expérience !
Juste une petite apartée, certaine personnes nomment aussi RT-PCR la PCR quantitative (pour Real Time-PCR), il ne faut donc pas confondre les deux techniques.
