Bonjour !
Alors j'ai un compte-rendu à rendre sur l'analyse du gène de résistance à la tétracycline. L'étude se fait sur une souche résistante (TetC) et deux souches mutantes (M1 et M2) qui ont perdu cette résistance. L'objectif est de trouver pourquoi : nature de la mutation et position.
Dans la 1ere partie du TP, on a amplifié par PCR les gènes TetC, M1, M2; on a réalisé une électrophorèse, qui a permis de quantifier les produits et aussi de déduire que M1 avait subit un substitution et M2 une délétion.
Ensuite chaque produits de PCR ont été clonés dans un plasmide ouvert par EcoRV au cours d'une ligation.
Les plasmides recombinants ont été introduits dans des bactéries par transformation.
Les colonies de bactéries issues de cette dernière ont été isolées sur gélose.
Les colonies de bactéries contenant un plasmide recombinant se différencient des autres colonies bleues par leur couleur blanche.
Et enfin après purification de l'ADN plasmidique des bactéries, on a réalisé son analyse par digestion enzymatique.
J'ai compris l'essentiel du TP je pense, mais je bloque encore sur certaines choses...
Lors de la ligation, on a dû préparer 5 tubes pTetC, pM1, pM2, et 2 tubes témoins. Ils contiennent tous le vecteur digéré. Ce que je n'arrive pas à résoudre, c'est pourquoi il y a deux témoins et l'information qu'ils apportent, sachant que T1 ne contient pas de ligase, et T2 en contient... Le prof m'a fait comprendre que c'était une question important à résoudre pour la suite, mais je sèche un peu! Donc en fait pour le moment j'aimerai savoir le rôle des témoins, pourquoi 2 témoins, la différence ? Témoin de ligation etc....
Bon merci d'avance pour ceux qui pourront m'aider ^^ !
Et j'attends avec impatience des réponses![]()
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