PCR et gamètes
Bonjour
On fait une transgenèse
on prend un mâle et une femelle hétérozygotes pour le transgène, les cellules transgéniques se trouvent dans les gonades et donnent des gamètes. On prélève des gamètes portants le gène d’intérêt repéré par PCR
comment faire pour savoir si un gène est vraiment présent dans un gamète avec une pcr? Si on prend le gamète et qu'on utilise son adn dans la pcr on peut savoir mais on a perdu le gamète... comment faire une fécondation ensuite?
aidez moi svp
Tu es sur qu'on fait le test sur les gametes et non pas à partir de cellules prélevées sur les embryons ?
YOyo
c'est un ennoncé ca?
J'imagine que non.
Si ton animal est hétérozygote ca signifie qu'il est +/- pour ton gène d'interet. Si tu veux savoir si il est +/- tu n'as pas besoin d'aller là où le gène s'exprime. Tu peux faire ta pcr sur de la peau ou ce que tu veux.
Comment cela fonctionne. Deux façons:
La première: tu as deux amorces qui encadrent ta mutation. Le gène sauvage a une taille le gène muté une autre. tu amplifies deux fragements de taille différente et tu as deux bandes.
La seconde: une paire avec une amorce qui cible la region mutée. Tu n'amplifies que ta region mutée si elle est presente. Une autre paire qui elle cible sauvage qui a été mutée. Tu n'amplifies que la region sauvage.
Je ne vois en effet pas bien comment tu peux selectionner les gametes par PCR. Il faut lyser les cellules et extraire l'ADN. En plus, en admettant que par miracle tu puisses reconstituer une cellule viable (hem....) une PCR sur une seule cellule est un enfer.
Le plus simple c'est quand même de laisser faire la nature et de selectionner tes mutants ensuite par PCR.
