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Floculation des protéines



  1. #1
    circebio

    Exclamation Floculation des protéines

    Bonjour à tous,
    J'ai un souci avec ma production de protéines,
    J'ai fait une dialyse à 4°C ON, puis j'ai récupéré, dosé et aliquoté ma fraction protéique.
    Après décongélation, je me suis aperçu que mes protéines avaient Floculées !
    Avez vous une technique ou astuce pour éviter cela ?
    Merci d'avance !

    -----


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  3. #2
    Aqualung

    Re : Floculation des protéines

    La floculation est due au potentiel zeta de la protéine.

    Celle-ci est favorisée justement par des basses températures...si ton protocole ne permet pas de modifier la température il te reste plusieurs autres solutions :

    * ajuster le pH pour atteindre un point où les particules colloïdales sont chargées
    * diminuer la salinité pour augmenter la couche diffuse
    * favoriser la charge de surface


    le plus simple étant la première solution

  4. #3
    Zellus

    Re : Floculation des protéines

    Salut,

    Pour ma part, j'ai une réponse totalement différente ...
    Comment as-tu décongelé tes protéines ? En les laissant décongeler sur ta paillasse ou dans la glace ?
    Que ce soit l'une ou l'autre des réponses (à moins que tu fasses autrement), le résultat va être le même : ta protéine risque de s'agréger. Le secret, c'est de décongeler ta protéine le plus rapidement possible en tenant ton tube dans la main (pour des petits volumes), ou en le mettant dans de l'eau tiède (pour des grands volumes). Et dès que ta protéine a fini de décongeler, tu peux alors la mettre dans la glace.
    Voilà, j'espère ne pas avoir répondu à côté.

    PS : C'est pour la même raison (c'est-à-dire pour éviter l'agrégation des protéines) qu'on les congèle rapidement aussi en utilisant par exemple de l'azote liquide.

  5. #4
    Aqualung

    Re : Floculation des protéines

    Ha d'accord merci de la réponse. Je n'ai jamais expérimenté du point de vue d'un épendorf, mes réponses viennent de techniques industrielles, je pensais qu'elles étaient également applicables aux petits volumes.

    désolé de la méprise

  6. #5
    Zellus

    Re : Floculation des protéines

    Bonjour,

    Citation Envoyé par Aqualung
    Ha d'accord merci de la réponse. Je n'ai jamais expérimenté du point de vue d'un épendorf, mes réponses viennent de techniques industrielles, je pensais qu'elles étaient également applicables aux petits volumes.

    désolé de la méprise
    Non mais y a pas de soucis Aqualung.
    Je ne connais pas tous les termes que tu utilises (potentiel zêta, couche diffuse) mais si j'ai bien compris, tu as cité des moyens d'éviter l'agrégation des protéines, à savoir :
    * ajuster le pH pour atteindre un point où les particules colloïdales sont chargées
    Ajuster le pH pour éviter le point isoélectrique pour lequel une protéine est électriquement neutre et va aussi s'agréger.
    * diminuer la salinité pour augmenter la couche diffuse
    Ajuster la concentration en sels. On peut la diminuer, ou bien l'augmenter. Tout dépend de la protéine étudiée, car elles n'ont pas toutes le même comportement.
    * favoriser la charge de surface
    Euh ... ça je sais pas trop. C'est un peu lié au deux premiers points non ?

    Enfin, voilà ce que j'ai compris dans ton message. Arrête-moi si je me trompe.
    Mais tout ça pour dire que, quelque soit le volume utilisé, les protéines restent des protéines et elles ont donc les mêmes besoins.

    En revanche, circebio parlait d'autre chose. Généralement, après avoir purifié une protéine, on l'aliquote en petites fractions que l'on congèle. Et quand on veut faire des manips dessus (tests d'activité ...), il faut faire attention à la décongélation. Voilou !!

  7. A voir en vidéo sur Futura

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