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Stockage des bactéries thermocompétentes?



  1. #1
    elodie22

    Stockage des bactéries thermocompétentes?

    Bonjour,
    première question sur ce forum pour une petite nouvelle.
    Je travaille avec des bactéries thermocompétentes, des E.Coli TOP10mais elles ont été stockées à -20°C au lieu de -80°C pendant deux mois environ.
    Après transformation de ces bactéries (avec mon vecteur et le vecteur de contrôle), je n'ai obtenu aucune colonie sur boite de pétri.
    Est-ce que ce résultat peut être du au problème de stockage?
    Merci pour vos réponses
    Elodie

    -----


  2. #2
    sacharybalka

    Re : Stockage des bactéries thermocompétentes?

    Tout à fait, le stockage à -80 semble être crucial pour ces petites bêtes. Je crains que tu ne sois obligée de les jeter. Désolée...
    La Doua dans l'Oeil, par et pour les étudiants!

  3. #3
    elodie22

    Re : Stockage des bactéries thermocompétentes?

    Merci pour la réponse! je m'en doutais un peu.
    J’ai effectué un test supplémentaire. Mettre mes bactéries à pousser sans agent de sélection. Elles ont bien poussé. L’absence de colonie serait donc du à la perte de compétence de mes bactéries ?

  4. #4
    kamor

    Re : Stockage des bactéries thermocompétentes?

    C'est possible, la stabilité d'un plasmide est souvent lié à son utilisation par la bactérie, si celui ci n'apporte aucun avantage sélectif, celui ci sera délété (avantage sélectif, pas besoin de le dupliquer, de le transcrire/ traduire, etc.)
    Cela sous entendrait donc qu'il y ait eu une activité le temps que les cellules soient effectivement congelés ou après. Vu le temps de génération de coli, ça peut s'envisager.

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