Bonjour,
première question sur ce forum pour une petite nouvelle.
Je travaille avec des bactéries thermocompétentes, des E.Coli TOP10mais elles ont été stockées à -20°C au lieu de -80°C pendant deux mois environ.
Après transformation de ces bactéries (avec mon vecteur et le vecteur de contrôle), je n'ai obtenu aucune colonie sur boite de pétri.
Est-ce que ce résultat peut être du au problème de stockage?
Merci pour vos réponses
Elodie
Tout à fait, le stockage à -80 semble être crucial pour ces petites bêtes. Je crains que tu ne sois obligée de les jeter. Désolée...
La Doua dans l'Oeil, par et pour les étudiants!
Merci pour la réponse! je m'en doutais un peu.
J’ai effectué un test supplémentaire. Mettre mes bactéries à pousser sans agent de sélection. Elles ont bien poussé. L’absence de colonie serait donc du à la perte de compétence de mes bactéries ?
C'est possible, la stabilité d'un plasmide est souvent lié à son utilisation par la bactérie, si celui ci n'apporte aucun avantage sélectif, celui ci sera délété (avantage sélectif, pas besoin de le dupliquer, de le transcrire/ traduire, etc.)
Cela sous entendrait donc qu'il y ait eu une activité le temps que les cellules soient effectivement congelés ou après. Vu le temps de génération de coli, ça peut s'envisager.
