Insertion vecteur

[invite631ae3c0]

Bonjour. Je voudrais savoir quel est la méthode qui peut permettre de detecter l'insertion d'un vecteur en l'occurence moi c'est pour le vecteur pAC161 . Je pensais à une PCR qu'en pensez vous?
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[Flyingbike]

oui en effet il doit y avoir des séquences prévues pour amplifier une partie du vecteur contenant l'insert, ou bien tu peux designer des amorces pour le faire : par exemple une avant le site de clonage, une dans ton insert. Il y a aussi beaucoup plus rapide : la digestion de restriction. Tu choisis un site unique du vecteur qu'on retrouve aussi dans l'insert, tu digères et en fonction du nombre et de la taille des fragments tu peux dire s'il y a insertion et même si elle est bien orientée.

[invite631ae3c0]

oui en effet il doit y avoir des séquences prévues pour amplifier une partie du vecteur contenant l'insert, ou bien tu peux designer des amorces pour le faire : par exemple une avant le site de clonage, une dans ton insert. Il y a aussi beaucoup plus rapide : la digestion de restriction. Tu choisis un site unique du vecteur qu'on retrouve aussi dans l'insert, tu digères et en fonction du nombre et de la taille des fragments tu peux dire s'il y a insertion et même si elle est bien orientée.

Ok.merci on a choisi la PCR avec des amorces car la digestion de restriction je ne l'ai pas vu en cour. Par contre l'autre soucis c'est de savoir ensuite si je choisi une PCR/RFLP ou PCR/RAPD car meme avec les avantages et inconvénients des 2 je n'arrive pas à choisir.
Merci beaucoup

[invite631ae3c0]

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