Petite interrogation sur les enzymes de restrictions

[invited93a84dc]

Je fais en ce moment un TPE sur l'adn dans la police scientifique et notre professeur de SVT nous à posée un problème:
Il y aurait à priori une différence du nombres d'enzymes de restriction utilisé dans le PCR pour multiplier l'ADN. Celui de la France serait différent de celui des Etats-Unis par exemple.
Ma question est donc : Combien y-a t-il d'enzymes de restriction pour l'utilisation du PCR en France?

J'espère que j'ai été clair...
En attendant vos réponses pour les spécialistes...
Merci d'avance.
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[invite71f23525]

Bonjour,

Je pense que ta question part mal dès le début...Tu ne veux pas dire plutôt enzymes de polymérisation par hasard, ce qui me semble plus en accord avec le terme PCR que tu emplois...?

Greg

[inviteae6c05c4]

Bonjour,

Non, ce n'est pas clair du tout ! Déjà, question de langage, on parle d'une PCR (une réaction).

Pour la suite, je n'ai absolument rien compris.

Note : les enzymes de restriction sont excessivement nombreuses et, bien que je ne connaisse par leur utilisation lors d'une PCR (plutôt sur les étapes amont/aval, non ?), je ne pense pas qu'on en utilise 36 pour une même manip.

Cordialement

[Flyingbike]

je pense qu'il parle des études par RFLP !

[A voir en vidéo sur Futura]

[invited93a84dc]

Excuse moi si je n'est pas utilisé le bon terme, j'ai écris ce message un peu rapidement, c'est vrai que c'est LA PCR et , vous avez raison, il n'y a pas d'enzyme de restriction mais ce sont les enzymes polymérase dont je parlais (ou TAQ polymérase). Voilà après cette correction pouvez vous répondre à ma question précedemment posé.
Je m'excuse encore nous sommes encore en préparation, on a encore 1 mois et demi pour finaliser tous ça, donc tous n'est pas clair mais heureusement que vous êtes là ça permet de me corriger.
Cordialement.

[inviteae6c05c4]

La Taq polymérase est une enzyme extraite d'un bactérie : Thermus aquaticus (d'où Taq) qui vit dans les sources chaudes (d'où l'activité optimale de l'enzyme a 72°C).

Il existe probablement plusieurs souches de cette bactérie, également plusieurs fournisseurs de l'enzyme, mais concrètement je ne crois pas que ça implique une grande diversité au niveau fonctionnel de l'enzyme.

[invited93a84dc]

Merci pour toutes ces infos. Mais est-ce que ce nombre d'enzymes diffèrent selon les pays, ou alors je n'ai peut-être pas bien compris la question de mon prof, peut-être est-ce autre chose qui varie selon les pays ???

[Edelweiss68]

Plusieurs polymérases peuvent être utilisées pr la PCR.
La taq est bien connue mais je ne crois pas que ce soit sous sa forme naturelle qu'elle est utilisée actuellement lors des manips, en effet, elle fait énormément d'erreurs bien qu'elle ait l'avantage de rajouter sa petite touche personnelle à chaque amplification en rajoutant un A à la fin de la séquence amplifiée, bien pratique pr la purification des produits de PCR.
Ce sont plutôt des polymérases obtenues par génie génétique et recombinées qui sont utilisées à présent, certaines ont une activité de correction 3' vers 5' exonucléasique.
Je ne sais pas ce qu'ils utilisent aux EU mais à mon avis même en France cela dépend du labo, du budget...

[invited93a84dc]

Merci bien de m'avoir répondu, le nombre des taq dépendrai donc du budget du labarotoire?

[invite71f23525]

Je ne penses pas du tout que ce soit une question de budget. Les protocoles varient d'un laboratoire à l'autre, au sein d'une même ville. Pour les laboratoires de la police scientifique, peut-être y a-t-il des protocoles communs à l'ensemble de ces laboratoires en France (ce qui expliquerait cette comparaison France vs USA). Dans tous les cas, la variabilité des protocoles est très courante s'il n'y a aucune obligation de standardisation.

Greg

[Flyingbike]

Vous etes sur qu'il ne s'agit pas d'enzymes de restriction ? Ca collerait plus a l'interrogation initiale de Valentino6 puisque en effet, la police peut étudier l'ADN en analysant les polymorphisme de restriction (RFLP) qui justement peut faire invervenir un grand nombre d'enzymes différentes...

[invited93a84dc]

Alors je vous explique plus clairement, mon prof de SVT nous as dit que l'année dernière, il avait eu un TPE (sur la police scientifique, comme nous) ou il avait été question d'un nombre d'enzyme de ?? qui servent pour la PCR, et ce nombre varie en fonction des pays. Le pourcentage de chance de se tromper sur le plan judiciaire au niveau de l'analyse de l'ADN dépend de ce nombre... Merki les filles!!

[Edelweiss68]

Ne serait-il pas plus simple de redemander à ton prof de quoi il s'agit?