Analyse résultats PCR - TPE
Bonjour,
Dans le cadre de nos recherches éducatives pour les TPE, nous recherchons des informations concernant la PCR utilisée pour différencier deux individus et trouver un lien de parenté avec un autre individu. Nous aurions besoin de savoir comment, à partir d'une PCR, peut-on différencier des individus.
Néanmoins, nous aimerions des schémas et des explications.
Merci d'avance à vous
Je vois plusieurs méthodes reposant sur la PCR.
De la plus évidente à la moins évidente (pour une lycéen):
Vous avez une délétion/insertion dans le génome.
1. Vous bornez le site variant par PCR. Le fragment amplifié est plus court/plus grand que dans la population générale.
2. Dans le cas d'une délétion vous ciblez une de vos amorces dans la région disparue. Vous n'amplifiez rien alors que l'on amplifie quelque chose dans la population générale. Idem en reverse pour l'insertion. Vous ciblez une de vos amorces dans la région insérée. Vous amplifiez quelque chose alors que l'on amplifie rien dans la population générale.
Vous avez une mutation ponctuelle. Les méthodes sus citées ne donneront rien.
3. La mutation génère/détruit un site de restriction. Vous le voyez en procédant à une digestion de restriction effectuée sur un produit PCR bornant le site de mutation.
4. L'extrémité 3' d'une amorce doit absolument être complémentaire du fragment à amplifier faute de quoi l'ADN polymérase ne peut pas amorce la réplication. Vous ciblez pile l'extrémité 3' de votre amorce sur le site muté. La PCR ne fonctionne pas contrairement à la population générale. Vous décallez d'une base en direction 5' et là la PCR fonctionne prouvant que la base est bien mutée par rapport à ce que l'on attendait.
Cordialement,
piwi
Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
