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Point isoéléctrique d'une enzyme



  1. #1
    mortabit

    Question Point isoéléctrique d'une enzyme


    ------

    Bonjour,

    Je souhaite faire passer ma protéine par une chromatographie échangeuse d'ions, mais je ne sais pas commet est elle charger???
    comment déterminer son Point isoéléctrique .


    Merci de votre aide

    -----

  2. Publicité
  3. #2
    nowell

    Re : Point isoéléctrique d'une enzyme

    Bonjour
    Vous pouvez faire plus simple qu'une chromato à ions, étant donné que vous ne connaissez par le pHi. Vous pouvez faire une chromatographie d'affinité avec le substrat connu de l'enzyme.

    Le principe consiste à augmenter petit à petit la concentration en substrat de l'éluant. Et votre enzyme suivra avec la concentration.

  4. #3
    Katie20012

    Re : Point isoéléctrique d'une enzyme

    Hello;
    Vous pouvez determiner le pHi de votre enzyme par FOCALISATION ISOELECTRIQUE ET ELECTROPHORESE BIDIMENSIONELLE, voici deux liens:
    http://www.chimie-biochimie.umoncton...iitub/FIE.html
    http://www.cnam.fr/depts/scbn/electr...o/TP5image.pdf
    Cordialement,
    Katie.
    "On se lasse de tout,excepté d'apprendre."-Virgile.

  5. #4
    Zellus

    Re : Point isoéléctrique d'une enzyme

    Bonjour,

    Citation Envoyé par nowell
    Vous pouvez faire plus simple qu'une chromato à ions, étant donné que vous ne connaissez par le pHi. Vous pouvez faire une chromatographie d'affinité avec le substrat connu de l'enzyme.
    Il est quand même difficile de faire plus simple qu'une échangeuse d'ions.
    La chromatographie d'affinité nécessite que le substrat de la protéine (ici une enzyme) soit lié à la résine. Mais il n'existe pas forcément dans le commerce de colonne avec le substrat dont mortabit a besoin. De plus, ces colonnes sont généralement beaucoup plus chères que les échangeuses d'ions (on peut aussi se les fabriquer soi-même avec une résine possédant un molécule réactive à sa surface mais ça reste assez pénible à faire, et on n'est pas forcément sûr du résultat).
    Citation Envoyé par Katie20012
    Vous pouvez determiner le pHi de votre enzyme par FOCALISATION ISOELECTRIQUE ET ELECTROPHORESE BIDIMENSIONELLE
    Une simple focalisation isoélectrique suffit. Pas besoin de faire une deuxième dimension.
    Mais sinon mortabit, tu peux tout simplement entrer la séquence de ta protéine (si tu la connais) dans ProtParam qui te donnera un pI théorique largement suffisant pour savoir si tu dois utiliser une échangeuse d'anions ou de cations.

  6. #5
    nowell

    Re : Point isoéléctrique d'une enzyme

    (on peut aussi se les fabriquer soi-même avec une résine possédant un molécule réactive à sa surface mais ça reste assez pénible à faire, et on n'est pas forcément sûr du résultat).
    --> Déjà fait ^^, dans un tipp de P1000 d'ailleurs, je vous parle pas du bricolage de compèt'!

  7. A voir en vidéo sur Futura

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