Point isoéléctrique d'une enzyme

[invite71ff4659]

Bonjour,

Je souhaite faire passer ma protéine par une chromatographie échangeuse d'ions, mais je ne sais pas commet est elle charger???
comment déterminer son Point isoéléctrique .


Merci de votre aide
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[inviteb3a6feac]

Bonjour
Vous pouvez faire plus simple qu'une chromato à ions, étant donné que vous ne connaissez par le pHi. Vous pouvez faire une chromatographie d'affinité avec le substrat connu de l'enzyme.

Le principe consiste à augmenter petit à petit la concentration en substrat de l'éluant. Et votre enzyme suivra avec la concentration.

[invite7249a892]

Hello;
Vous pouvez determiner le pHi de votre enzyme par FOCALISATION ISOELECTRIQUE ET ELECTROPHORESE BIDIMENSIONELLE, voici deux liens:
http://www.chimie-biochimie.umoncton...iitub/FIE.html
http://www.cnam.fr/depts/scbn/electr...o/TP5image.pdf
Cordialement,
Katie.

[Zellus]

Bonjour,

Vous pouvez faire plus simple qu'une chromato à ions, étant donné que vous ne connaissez par le pHi. Vous pouvez faire une chromatographie d'affinité avec le substrat connu de l'enzyme.

Il est quand même difficile de faire plus simple qu'une échangeuse d'ions.
La chromatographie d'affinité nécessite que le substrat de la protéine (ici une enzyme) soit lié à la résine. Mais il n'existe pas forcément dans le commerce de colonne avec le substrat dont mortabit a besoin. De plus, ces colonnes sont généralement beaucoup plus chères que les échangeuses d'ions (on peut aussi se les fabriquer soi-même avec une résine possédant un molécule réactive à sa surface mais ça reste assez pénible à faire, et on n'est pas forcément sûr du résultat).

Vous pouvez determiner le pHi de votre enzyme par FOCALISATION ISOELECTRIQUE ET ELECTROPHORESE BIDIMENSIONELLE

Une simple focalisation isoélectrique suffit. Pas besoin de faire une deuxième dimension.
Mais sinon mortabit, tu peux tout simplement entrer la séquence de ta protéine (si tu la connais) dans ProtParam qui te donnera un pI théorique largement suffisant pour savoir si tu dois utiliser une échangeuse d'anions ou de cations.

[A voir en vidéo sur Futura]

[inviteb3a6feac]

(on peut aussi se les fabriquer soi-même avec une résine possédant un molécule réactive à sa surface mais ça reste assez pénible à faire, et on n'est pas forcément sûr du résultat).

--> Déjà fait ^^, dans un tipp de P1000 d'ailleurs, je vous parle pas du bricolage de compèt'!