le test MTS :sos:

[invite1dfacbf3]

Bonjour

Je dois réaliser un exposé sur un article d'immunologie, mais j'ai quelques soucis de comprehension du matériel et méthode.

Dans l'article d'immunologie que j'ai lu, les auteurs utilisent le test colorimétrique MTS pour mesurer la production d'IL4, sur des cellules CT.4S. Au départ on a des cellules de rate B6 dans les puits, avec ou sans OVA (Ag soluble). Pour réaliser ce test MTS, ils ont du prélever du milieu de culture alors non ?
De plus j'ai lu que le MTS est un composé qui est bioréduit par les cellules en un produit coloré : le formazan qui est soluble et dont on peut mesurer la quantité en mesurant l'absorbance à 490nm; et que cette quantité est proportionnelle au nombre de cellules vivantes en culture. Comment est-ce qu'ils relient le nombre de cellules vivantes à la quantité d'IL4 ? (sur la figure l'unité est U/mL).

De plus dans l'article ils disent que la spécificité de ce test est assurée par l'analyse d'aliquots d'échantillons représentatifs avec un "Abm" anti IL4 (traduit en français, est-ce bien Ac membranaire ? ça semble bizarre que ça soit membranaire cependant :s). Après ils disent que la présence de rIL-2 n'altère pas significativement la courbe standard obtenue avec rIL-4 : qu'est-ce que le "r" devant IL, et en quoi IL2 peut géner la détection précise d'IL4 ?

Voilà, j'ai posé beaucoup de questions, mais j'espère que vous pourrez m'aider et si c'est le cas je vous en remercie énormément
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[fabien.che]

Comme tu l'a décris, le MTS est un réactif métabolisé par les cellules vivantes et ne mesure donc que la viabilité cellulaire.

Je m'en sers régulièrement pour mesurer la prolifération cellulaire. Je ne vois pas comment on peut corréler cela à une production d'IL-4.

[invite7249a892]

Comme tu l'a décris, le MTS est un réactif métabolisé par les cellules vivantes et ne mesure donc que la viabilité cellulaire.

Je m'en sers régulièrement pour mesurer la prolifération cellulaire. Je ne vois pas comment on peut corréler cela à une production d'IL-4.

Hello;
Et bien si justement, car l'IL-4 joue un role dans la prolifération cellulaire des cellules B (la sécrétion de l'IL-4 et d'autres interleukines par les lymphocyte T sur la surface de la cellule B active non seulement la cellule B mais il stimule aussi la cellule pour qu'elle produise davantage de glycoprotéines de classe II du CMH, augmentant ainsi la capacité qu'a la cellule B de recevoir l'aide de la cellule T).
Cordialement,
Katie.

[fabien.che]

Ouais, enfin c'est quand même un peu bancale comme manip. L'IL-4 ne doit pas être la seule cytokine/molécule à faire proliférer les cellules T. Un simple test MTS permet simplement de répondre à la question de : oui ou non, il y a prolifération. Mais cela n'indique pas ce qui favorise ou inhibe la prolifération. A moins que tu n'ajoute dans ton milieu qu'une seule molécule (par exemple, l'IL-4 !), mais visiblement ce n'est pas le cas ici.

Pourrais-t-on avoir un extrait du protocole en anglais, histoire de se faire une idée plus précise ? (la référence complète de l'article, le cas échéant ?)

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite1dfacbf3]

Merci pour vos réponses

Voici un extrait du protocole :

IL-4. IL-4 levels were determined using an MTS colorimetric assay employing CT.4S (cells provided by Dr. W. Paul, National Institute of Allergy and Infectious Diseases, National Institutes of Health, Bethesda, MD) as previously described (39). The specificity of this assay was assured by analysis of representative sample aliquots with anti-IL-4 mAb (11B11), with values inhibited by > 85% attributed to IL-4. The presence of rIL-2 did not significantly alter the standard curve obtained with rIL-4. As used here, this assay detects IL-4 at 0.1 to 0.25 U/ml and readily quantitates IL-4 levels above 0.5 U/ml while being unresponsive to IL-2 levels < 200 U/ml

la référence de l'article : "Natural Killer Cell Depletion Fails to Influence Initial CD4 T
Cell Commitment In Vivo in Exogenous Antigen-Stimulated
Cytokine and Antibody Responses"
MingDong Wang,* Cynthia A. Ellison,*† John G. Gartner,*† and Kent T. HayGlass2*
The Journal of Immunology, 1998, 160:1098–1105.