Calibration qRT-PCR sur cellule unique

[invite50cb7a9c]

Bonjour,

Je me demandais dans le cas où l'on réalise une qRT-PCR sur les ARNm provenant d'une cellule unique, est ce qu'on doit partir de la même quantité d'ARNm pour tous les échantillons ou comme c'est les ARNm d'une seule cellule on peut s'affranchir de ce biais puisque l'on compare les niveaux d'expression d'un gène d'une cellule à une autre ( la variabilité des quantité d'ARNm serait inter-cellules) et bien sur en utilisant un gène de ménage comme référence pour chaque échantillon. Je ne sais pas si j'ai été claire...

Merci
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[Flyingbike]

de toute facon, comment doser les ARN d('une seule cellule ?

[invite853321bf]

D'un point de vue théorique, je dirais que non. On fait cela pour partir sur une base commune et éviter tout risque lié à une inhibition du à une quantité trop importante de cibles.
Là, vu qu'on aurait une base commune qui serait la cellule, et qu'on aurait pas d'inhibition de la réaction, on pourrait surement s'affranchir de cette étape.
Mais je rejoins flyingbike, ce n'est que théorie dès le départ.

[gorben]

A la base si ton gene de menage est vraiment tres solide, tu peux meme te passer de quantifier l'ARN au depart.
Tu quantifies tout sur le gene de menage apres ta qPCR.

a+

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite50cb7a9c]

ok, merci pour vos réponses, c'est ce que j'ai pensé également...