Répondre à la discussion
Affichage des résultats 1 à 5 sur 5

Cross-Linking



  1. #1
    calimeroz

    Cross-Linking


    ------

    Bonjour,

    Dans cet article,

    "Two Adjacent Trimeric Fas Ligands Are Required for Fas Signaling and Formation of a Death-Inducing Signaling Complex",
    in Molecular and Cellular Biology, Feb. 2003, p. 1428-1440

    Je dois juste comprendre les techniques utilisées par les auteurs. En gros, je pense que c'est bon, mais je reste bloqué sur le procédé de cross-linking.
    Que signifie-t-il ? A quoi sert-il ?

    Bon je pense n'avoir pas été totalement claire. Je vous donne un exemple :

    FasL peut-être clivé par une métalloprotéase, libérant une forme soluble de FasL qui, dans ce cas, n'active plus la voie de signalisation induite par l'activation de Fas mais l'inhibe. Par contre, les auteurs ont démontré que la restauration de la forme dimérisée de FasL (en fait deux trimers) soluble permet de rétablir la voie de signalisation médiée par l'activation de Fas. Ils ont générés pour cela deux type de constructions chimères. 1/ Fc:FasL (FasL fusionné avec un dimère d'IgG) et 2/ ACRP:FasL (FasL fusionné avec à une protéine sérique).

    Maintenant voila le passage en question :

    "[...] In contrast to Fc:FasL and ACRP:FasL, FasL is generally not or only poorly cytotoxic. However, cross-linging via the Flag tag enhances its activity by at least 2 or 3 orders of magnitude, allowing it to reach the same specific activity as ACRP:FasL. Cross-linking of ACRP:FasL does not significantly enhance its cytotoxicity, indicating that hexameric FasL is a unit fully capable of activating the Fas pathway. It is noteworthy that the intrinsic cross-linked nature of ACRP:FasL circumvents problems linked to an inadequate ration of ligand to cross-linking antibody. [...]"

    Merci, et tant pis si vous ne comprenez pas mon problème.

    A plus

    Cal.

    -----

  2. Publicité
  3. #2
    lft123

    Re : Cross-Linking

    Bonjour,

    Cross-linking, signifie réticulation grosso-modo l'établissement d'une liaison entre deux molécules séparées.


    @+

  4. #3
    alli

    Re : Cross-Linking

    re-hello calimeroz,

    FasL et Fas sont naturellement trimerisés à la surface des cellules qui les expriment (mais je ne sais pas si cette trimerisation est due à des pontages di-sulfures, ou si c'est juste due à des liaisons electrostatiques).

    La partie extracellulaire solubilisée de FasL [ sFASL ] (obtenue par action naturelle des metaloprotéses ou par biologie moleculaire) forme naturellement un trimere.
    Les auteurs ont ajoutés à la partie extracellulaire de sFasL la sequences codant pour le peptide FLAG qui est reconnu spécifiquement par un anticorps anti-FLAG. L'ajout de cet anticorps entraine l'aggregation des trimeres FLAG-sFasL donnant un polymere de sFasL.


    Paralellement, les auteurs ont ajoutés à la partie extracellulaire de FasL les sequences codant pour ACRP ou Fc qui apres traduction et translocation dans le RE vont subir des pontages inter-chaines (pont sdi-sulfures sensible au DTT, et vraissemblablement aussi des bases de shiff comme dans le collagene, insensibles au DTT). Ce qui aboutit à la production d'un hexamere de 2 x trimere de sFASL.
    Les ACRP-sFASL possede aussi la sequence FLAG, qui permet aux auteurs, après ajout de l'atc anti-FLAG d'avoir un polymere d'hexamere.

    Ouf...!

    Pour résumer l'article, le trimere de sFasL est capable de se fixer sur fas tout comme l'hexamere, mais à l'inverse de l'hexamere il n'est pas capable de transduire le signal apoptotique. Donc seule l'hexamere (ou plutot le dimere de trimere) peut le faire.
    Le trimere sFasL joue donc le role d'antagoniste competitif.

    Maintenant, comment interpreter le fait que bien que tous les deux, trimere et hexamere, puissent lier le même recepteur Fas, on a apoptose ou pas ?
    Les auteurs dans leur discussion évoquent le fait que l'hexamere (mais pas le trimere) est capable d'induire la production d'hormones lipophiles de type ceramides qui favoriserait la formation du complexe DISC. Ils ont tres certainenant raisons, car je ne suis pas expert en apoptose. Mais j'avais lu (je n'ai plus la ref en tete), que FasL était capable en se liant à Fas d'induire l'hexamerisation de se dernier, et que seule Fas hexamerique était capable de recruter suffisament de FADD pour qu'on bascule en apoptose !

    Bon courage et A+

  5. #4
    calimeroz

    Re : Cross-Linking



    !! Encore merci Alli pour ces explications précieuses !!

    A plus, pour d'autres questions ...

    Cal.

  6. #5
    alli

    Re : Cross-Linking

    Salut Cal,

    Juste ne prend pas pour verité absolue le fait que FasL et Fas soient constitutivement trimerisées, préalablement à tous interaction l'un avec l'autre ! Verifier quand même dans la litterature, je n'ai fais que te donner des pistes.

    A+

  7. A voir en vidéo sur Futura

Sur le même thème :

Discussions similaires

  1. [Biologie Moléculaire] Test-cross
    Par bboop8 dans le forum Biologie
    Réponses: 1
    Dernier message: 10/11/2007, 17h53
  2. [Génétique] test cross
    Par bambou585 dans le forum Biologie
    Réponses: 3
    Dernier message: 26/10/2007, 13h10
  3. [Test-cross] Possibilités.
    Par Valenten dans le forum Biologie
    Réponses: 8
    Dernier message: 26/05/2007, 18h42
  4. bactérie : cross feeding?
    Par katiaestelle dans le forum Biologie
    Réponses: 3
    Dernier message: 15/02/2007, 14h47
  5. Cross-linking, IP, RNase A/T1 mapping
    Par mactouni dans le forum Biologie
    Réponses: 0
    Dernier message: 12/09/2005, 11h49