Interférence SDS/ELISA

[invitea5d6eedc]

Est il vrai que le SDS fait souvent rater des manips ELISA ? Pourquoi ?

Merci !!
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[Edelweiss68]

Bonjour,

J'ai trouvé ça:

"The presence of SDS during the coating stage disrupts ELISA [...]

Moreover, similar to our results, McCabe et al. also reported that the presence of high concentrations of detergent in the coating mixture interfered with ELISA but the effect was reduced by diluting the extracts before the coating stage.
The observation of many groups that SDS-induced enzymatic inactivation is occasionally reversible upon removal of the detergent provides additional support for our results. It is an indication that at least some segments of a polypeptide are refolded under these conditions."

Sodium dodecyl sulphate-treated proteins as ligands in ELISA
Journal of Immunological Methods
Volume 270, Issue 1, 1 December 2002, Pages 19-26

[invitea5d6eedc]

Merci beaucoup,
Pour tester une éventuelle interférence, si je dose un échantillon avec un kit elisa et ce même échantillon auquel j’aurais ajouté un peu de sds, ça peut marcher non ?

[Edelweiss68]

Tout dépend la concentration utilisée en SDS je suppose. L'article précédent dit:"There was complete inhibition of the ELISA when the human IgG used for coating was premixed with SDS at concentrations above 0.06%. At SDS concentrations below 0.004%, the ELISA results were indistinguishable from those obtained when the ligand was adsorbed to the microwells in the absence of SDS. Similar results were obtained with BSA (results not shown). "

[A voir en vidéo sur Futura]

[piwi]

Quand on arrive à des concentrations de SDS 0.004% dans un buffer, je me demande bien à quoi ça sert d'en mettre.

[invitea5d6eedc]

le truc c'est que moi je dose du milieu de culture d'explants de peau traités avec du SDS, ce n'est pas du SDS dans un buffer

[piwi]

Ca revient au même. Mais je comprends votre remarque, vous ne pouvez pas modifier la concentration de SDS dans votre milieu.
Cependant, plus en amont, ne pouvez vous pas remplacer le SDS qui vous sert à traiter vos tissus par un autre détergeant (non ionique par exemple)?

[invitea5d6eedc]

Ce n'est pas vraiment envisageable là non.
j'espère que tous mes résultats ne sont pas foireux quoi... !