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Gel SDS



  1. #1
    mortabit

    Gel SDS

    bonjour,

    je laisse migrer mes protéines sur le gel SDS jusqu a ce que le bleu arrivent à la fin du gel mais quand je rèvèle à l aide du bleu de Comassie je trouve mes protéines condensées au bout du gel.

    Note : je travaille avec un gel à 10%

    merci pour vos explications

    -----


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  3. #2
    Morphine

    Re : Gel SDS

    Salut,

    quelle taille font tes protéines?
    Es tu en condition dénaturante?
    Quel "bout" du gel?

    Sans ses infos, je doute qu'on puisse t'être d'une quelconque utilité.

    Morphine

  4. #3
    mortabit

    Re : Gel SDS

    Citation Envoyé par Morphine Voir le message
    Salut,

    quelle taille font tes protéines?
    Es tu en condition dénaturante?
    Quel "bout" du gel?

    Sans ses infos, je doute qu'on puisse t'être d'une quelconque utilité.

    Morphine

    justement je fait ce gel afin de déterminer la taille de ma protéine.
    je travaille en condition dénaturante.
    mes protéines restent en haut du gel , au début du gel de séparation.

    J arrete la migration quand le bleu arrivent ç la fin du gel.

    merci

  5. #4
    Bacillus 100

    Re : Gel SDS

    Si tu connais pas la tailles de ta protéine, je te conseille vivement d'utiliser un gel SDS en gradient 4-15% (par exemple) commercialisé. Sinon si t'as prot tu la vois vraiment en haut du gel et bien elle doit être de haut poids moléculaires donc tu devrais peut être préparer un gel de 6% pour voir un peu ce que sa donne

  6. #5
    mortabit

    Re : Gel SDS

    Citation Envoyé par Bacillus 100 Voir le message
    Si tu connais pas la tailles de ta protéine, je te conseille vivement d'utiliser un gel SDS en gradient 4-15% (par exemple) commercialisé. Sinon si t'as prot tu la vois vraiment en haut du gel et bien elle doit être de haut poids moléculaires donc tu devrais peut être préparer un gel de 6% pour voir un peu ce que sa donne
    merci, c est ce que j ai l intention de faire,et aussi je prévoit de prolonger le temps de migration.

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    Vinc

    Re : Gel SDS

    Bonjour!
    Que déposez vous exactement dans vos puits? Si c'est un extrait cellulaire total alors c'est certainement un problème lié à votre gel de résolution car il n'est pas normal que toutes les protéines soient en haut du gel (si c'est un extraits, tous les poids moléculaires seront représentés). Si vos marqueurs migrent normallement alors c'est peut-être autre chose. Pourriez vous poster une image de ce gel??

    En attendant vérifiez le pH de vos buffers, changez votre acrylamide et éventuellementr recommencez avec un gel qui a été coulé par quelqu'un d'autre et avec des solutions différentes.

    V.

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  10. #7
    mortabit

    Re : Gel SDS

    Citation Envoyé par Vinc Voir le message
    Bonjour!
    Que déposez vous exactement dans vos puits? Si c'est un extrait cellulaire total alors c'est certainement un problème lié à votre gel de résolution car il n'est pas normal que toutes les protéines soient en haut du gel (si c'est un extraits, tous les poids moléculaires seront représentés). Si vos marqueurs migrent normallement alors c'est peut-être autre chose. Pourriez vous poster une image de ce gel??

    En attendant vérifiez le pH de vos buffers, changez votre acrylamide et éventuellementr recommencez avec un gel qui a été coulé par quelqu'un d'autre et avec des solutions différentes.

    V.
    en fait je dépose un précipité (par sulfate d ammunium).
    J ai tout vérifié concernant le pH des tampons et les autres solutions.
    je vais essayer de mettre une photo gu gel

    Merci

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