méthode d'analyse des résultats de qPCR

[invite84ba569f]

Bonjour,

Je vais me lancer dans la qRT-PCR afin de quantifier l'expression de plusieurs gènes d'une même famille au cours du développement. En fait je dois comparer:
1- le niveau d'expression de chacun des gènes aux différents stades (profil d'expression au cours du développement)
2- le niveau d'expression de tous les gènes de la famille à un stade donné afin de pouvoir les comparer entre eux et dire par exemple que le gène A est 2 fois plus exprimé que B et 3 fois plus que C au stade J1. Je ne sais pas si c'est clair, je bute depuis ce matin, j'ai vu qu'il y a 2 méthodes: quantification absolue et relative avec les ddCt (c'est celle là qui est utilisé au labo) mais je ne vois pas comment l'utiliser dans mon cas.

Merci d'avance pour vos réponses
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[invite853321bf]

Je vous conseillerai assez d'aller voir ici http://www.gene-quantification.info/.
Un site qui je trouve explique très bien

[invite84ba569f]

Merci pour le lien, il y a bcp d'information, cependant il reste une question à laquelle j'ai pas de réponse: Est ce qu'on peut au sein d'un même échantillon, comparer les niveaux d'expression de plusieurs gènes différents entre eux? (sans faire une quantification absolue)

[invite2fb83916]

Oui dans votre cas il faut faire de la quantification relative simplement. Pourquoi ne pourrait - elle pas être utilisée dans votre cas???

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite84ba569f]

Oui dans votre cas il faut faire de la quantification relative simplement. Pourquoi ne pourrait - elle pas être utilisée dans votre cas???

D'habitude en qRT-PCR relative, du moins les papiers que j'ai lu, ils comparent l'expression d'un gène donné dans un un échantillon contrôle par rapport à un autre échantillon test ou plus. On compare toujours l'expression du même gène dans les différents échantillons.
Je me demandais si c'était possible de comparer plusieurs gènes différents entre eux dans un seul échantillon?

[invite853321bf]

Dans l'absolu, oui si vous avez un gène référence, autrement dit un gène dont l'expression est stable quelque soit le statut de la cellule.
Sinon comment savoir quel gène a une expression augmentée ou diminuée ?
Pour cela, on utilise ce qu'on appelle les gènes de ménage.

[piwi]

J'avais mis en pièce jointe dans une vielle discussion, un cours que j'ai fais sur la qPCR. Si l'envie vous dit de la chercher ^_^

piwi

[invite84ba569f]

Ok, je vais faire une petite recherche...

[invitef5962f47]

Si on prends plusieurs sondes fluorescentes différentes on peut normalement suivre l'expression de plusieurs gènes dans la même expérience. Sinon on m'avait envoyer le pdf d'Eurogentec sur la qPCR qui a pas mal d'informations aussi.