électrophorèse en champ pulsé

[invite37c39dc1]

Bonjour,
en fait je travail sur l'identification des leptospires par électrophorèse en champ pulsé, bon voila j'ai élaboré mon protocole j'ai préparé mes plugs et tout le machan en fin je me retrouve avec un gel je ne c pas comment interprété ca?
un gel ou le ladder apparait, une fluorescence qui apparait au niveau des puits pu j'ai débosé mes plugs par contre je ne vois pas de migration de mon ADN

Mes question sont les suivantes:
est ce que j'ai un problème au niveau de la préparation de plug ( pas d'ADN ) ou bien problème au niveau de l'enzyme que j'ai utilisé?
N.B: j'ai utilisé NotI comme enzyme spécifique au leptospires
je ne sais pas si il fut incuber dans le tampon de l'enzyme une nuit avant de faire la manip avec l'enzyme ou quoi au juste
mon souci c'est que ca soit un prob d'ADN (pas d'ADN sur mes plugs) par contre j'ai vue une fluorescence au niveau des puits mais je ne c'est pas si ca s'interprète avec présence d'ADN ou ca se vois même avec un témoins négatif

SVP aidez moi
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[invitef940923e]

Pour l'enzyme, non tu ne dois pas l'incuber avec le tampon avant ta restriction.
Au niveau des puits si tu vois de la fluo (quel type de coloration utilise tu ?) ca dois correspondre a de l'ADN maintenant est ce que la migration ne s'est pas bien passée ? Est tu sur be bien avoir orienté ton Gel ? As tu chargé assez d'ADN ?

[invite37c39dc1]

j'ai coloré avec BET et j'ai bien orienté mon gel mais je vois de la fluorescance sur les puits sans avoir de migration par contre le marqueur de taille a bien migré
je ne sais pas est ce que c'est probléme d'enzyme condition d'incubation ou pas bien mélanger ou il n y a pas d'ADN déjà (plugs mal préparé) vraiment j'ai peur que ca soit question d'ADN? a votre avis la fluorescance qui est dans les puits ca correspond a quoi ? et pkoi a votre avis il n y a pas de migration ?
Merci

[invite37c39dc1]

Bonjour,
c'est bon la manip a réussi
apparemment il y avais de l'ADN, c'est été un problème de condition d'incubation de l'enzyme

[A voir en vidéo sur Futura]