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enzymes et substrat biolux



  1. #1
    LD.ing

    enzymes et substrat biolux

    Bonjour tout le monde! Alors voila j'ai un problème à soumettre: dans le cadre de mon TPE sur la bioluminescence j'ai fait des recherches mais il y a une correspondance que je n'arrive pas à établir et qu est la suivante: On parle souvent de catalyse de luciférine par la luciférase en bioluminescence. D'ailleurs il y a 5 principaux systèmes correspondants à plusieus familles....
    Mais j'ai trouvé par ailleurs que les scientifiques utilisent d'autres genes: Lac Z(enzyme beta gal),GUS(enzyme beta gluc) en plus du LUC. Serait-il possible de me donner le rapport avec luciférine/luciférase et de me les intégrer tous les deux dans les principaux systèmes lumineux?
    Peut etre que le fait de savoir de quels organismes sont issus les substrats des deux enzymes pourrait m'éclairer un peu...
    J'espère n'avoir pas été trop longue et que vous pourrez me donner des éléments de réponses^^'Merci d'avance pour votre aide

    -----


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  3. #2
    Flyingbike

    Re : enzymes et substrat biolux

    La beta galactosidase est effectivement utilisée comme gène rapporteur mais elle ne produit pas de composé luminescent. C'est une enzyme qui catalyse la formation d'un produit coloré bleu généralement. Aucune émission de photon ici.

  4. #3
    LD.ing

    Re : enzymes et substrat biolux

    Merci beaucoup pour votre réponse cela signifie donc que ces deux gènes n'ont absolument rien à faire dans mon dossier sur la bioluminescence c'est bien ça? Je me permets de vous poser une autre question concernant la GFP cette fois... puis je l'intégrer dans le TPE en tant que système préchargé?(j'ai peur de m'être encore trompée)

  5. #4
    Flyingbike

    Re : enzymes et substrat biolux

    la GFP c'est encore autre chose. Elle n'a pas d'activité enzymatique contrairement a la ßgal ou luciferase. C'est simplement une protéine fluorescente, c'est à dire qu'elle émet des photons lorsqu'on l'excite a une longueur d'onde particulière. Elle n'utilise pas de substrat au sens chimique.
    La GFP seule est inerte. Si on l'excite avec un faisceau de lumière a 488nm, elle émet une fluorescence à 505nm.
    Elle n'est pas utilisée comme rapporteur de la même façon que la beta gal. A ma connaissance, la GFP n'est pas utilisée de façon quantitative à la différence des autres rapporteurs cités. Elle est par contre fortement utilisée comme "tag" ou comme transgène pour témoigner de l'expression d'un gène ou de la présence d'une protéine de façon qualitative (spatio temporel).

  6. #5
    LD.ing

    Re : enzymes et substrat biolux

    Mais le fait qu'elle ait été découverte dans l'Aequorea avec l'aequorine qui émet elle je crois des photons peut faire que je la mette en biolux non? Ou qu'au moins je le dise en insistant sur ce fait pour la prudence non? J'ai lu dans un livre que la fluorescence pouvait être entraînée par la biolux chez certains organismes...

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    Flyingbike

    Re : enzymes et substrat biolux

    certes, mais elle est différente de l'aequorine qui elle est catalytique. Tu peux en parler mais pas en temps que bioluminescence. Si tu veux tu peux ajouter une partie sur la fluorescence. non ?

    Pour ta dernière phrase, tu peux te renseigner sur l'utilisation de ce phénomène qu'on appelle BRET

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  10. #7
    LD.ing

    Re : enzymes et substrat biolux

    Merci c'est gentil d'avoir pris le temps de répondre je ferai comme vous m'avez proposé.

  11. #8
    LXR

    Re : enzymes et substrat biolux

    Citation Envoyé par Flyingbike Voir le message
    La beta galactosidase est effectivement utilisée comme gène rapporteur mais elle ne produit pas de composé luminescent. C'est une enzyme qui catalyse la formation d'un produit coloré bleu généralement. Aucune émission de photon ici.
    Il m'est arrivé de mesurer l'activité beta-galactosidase avec un luminomètre. Dans ce cas là, le substrat employé ne doit pas être du X-Gal comme il est coutume d'employer pour des tests de sous-clonage, mais un substrat luminescent.

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