Conservation du tampon RIPA + antiprotéases

[invitef5962f47]

Bonjour,

Je voudrais savoir si on peut conserver à 4 degrés le tampon RIPA auquel on a déjà ajouté une tablette d'antiprotéases (je doute que ces dernières conservent leurs activités très longtemps dans un tampon) ?

Merci d'avance.
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[invite71f23525]

Je ne pense pas que tu puisses garder ton tampon très longtemps. Ce n'est pas un hasard si les inhibiteurs de protéases sont ajoutés extemporanément au tampon, ils doivent être assez instables. Tu peux essayer de le conserver à -20°C pour allonger sa durée de conservation. A ta place, je le jetterais et en préparerais "dans les règles" pour ma prochaine manip.

[invite30157012]

Personnellement, si je fais plusieurs préparations de protéines dans la semaine je garde le même à 4°C... je n'ai jamais eu de problèmes, mais j'en refais du neuf chaque semaine par contre car en effet je ne pense pas que ce soit bien de le garder plus longtemps.

[Flyingbike]

l'idéal est de faire du tampon de base a conserver a +4, et de faire en parallèle une solution d'inhibiteurs qui se garde a -20. Il suffit d'ajouter la quantité suffisante extemporanément. Par exemple les tablettes de chez roche peuvent se dissoudre dans le tampon directement, mais on peut aussi faire un stock 25X qui se garde a -20.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitecc2a5091]

Oui , j'utilise le RIPA ajusté à 99 % avec l'eau autoclavé puis stocké à 4°C plusieurs mois sans problèmes et j'ajoute extemporanément mon coktail inhibiteur (à diluer au 1/100eme); ce dernier aliquoté et stocké à -20°C.
Maintenant il n'existe pas vraiment de test de dégradation des proteines aussi parlant qu''un gel comme pour l'ARN.

[invitef5962f47]

Tout d'abord merci de vos réponses. Je suis assez intéressé a l'idée d'aliquoter mes antiproteases, j'utilise les tablettes de Roche (les cOmplete, Mini Protease Inhibitor Cocktail Tablets plus exactement, une tablette pour 10 ml de tampon) mais je ne vois pas trop comment le faire.
Pour faire une solution stock 25X, je dois dissoudre une tablette dans 400 ul de tampon RIPA puis aliquoter (le volume me semble quand même assez faible) ?

Merci d'avance.