Comment dissoudre la Collagenase

[invite46feecda]

Bonjour,
J'ai un petit souci, afin de lancer une culture cellulaire à partir de tumeurs du sein, je dois utiliser de la collagenase mais celle que j'ai sous la main est en poudre, je dois alors la dissoudre (dans quel solvant?), mais je ne trouve aucun protocole qui m'indique avec précision quelle est la marche à suivre pour préparer de la collagenase prête à l'emploi.



Deux flacons de collagenase sont disponibles comportant les détails suivants:
SIGMA- Collagenase from Clostridium histolyticum / Ref: C7657-1G

et un autre flacon de collagenase crude typeIA SIGMA /Ref: C2674-1G


Merci d'avance pour votre aide!
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[inviteae6c05c4]

Bonjour,

Sur le site de Sigma, après avoir tapé votre référence produit, vous avez un cadre "Liens utiles et outils" à gauche, cliquez sur "Product information sheet". Vous trouverez ceci :
enzyme stock solution is prepared by dissolving 0.05 - 0.1 mg/ml collagenase in 50 mM TES buffer, pH 7.4, containing 0.36 mM calcium chloride

[invite46feecda]

Bonjour,

J'ai enfin trouvé un moyen de le faire:

To make 5% stock solution, dissolve 1 g of collagenase type I (Sigma, cat. no. C-2674) in 20 mL phosphate-buffered saline (PBS). Store at –20°C in single use aliquots of approx 0.5 mL. Make up 0.25% collagenase working solution by diluting stock solution 1:20 with PBS/20% FCS. Filter sterilize before use. As an alternative, make up 0.25% collagenase/PBS/20% FCS solution, filter and store in 5–10 mL single-use aliquots at –20°C.

Ce qui m'intrigue, c'est l'utilisation du Serum de veau foetal pour diluer la solution mère de collagenase, je croyais que le SVF inhibait les enzymes! qu'en pensez vous?

Sinon je ne comprends pas la différence entre ces deux phrases

Make up 0.25% collagenase working solution by diluting stock solution 1:20 with PBS/20% FCS. Filter sterilize before use.

et

As an alternative, make up 0.25% collagenase/PBS/20% FCS solution, filter and store in 5–10 mL single-use aliquots at –20°C.

Merci

[invite46feecda]

Merci fabien.che
Je n'avais pas vu votre message!
C'est très aimable à vous d'avoir pris la peine de me répondre!

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite46feecda]

Salut,

enzyme stock solution is prepared by dissolving 0.05 - 0.1 mg/ml collagenase in 50 mM TES buffer, pH 7.4, containing 0.36 mM calcium chloride

Comment dissoudre 0.05-0.1mg/ml alors que j'ai 1g de poudre, je n'ai pas une concentration ? :s

Merci !

[inviteae6c05c4]

Salut,



Comment dissoudre 0.05-0.1mg/ml alors que j'ai 1g de poudre, je n'ai pas une concentration ? :s

Merci !

Par exemple, peser 0,1 mg et reprendre dans 1 mL de tampon décrit précédemment.

[invite46feecda]

Bonjour,

Par exemple, peser 0,1 mg et reprendre dans 1 mL de tampon décrit précédemment

Oui, merci, j'aurai dû y penser!

Sinon, pour l'action du SVF... un avis?