Pcr
Bonjour à tous,
je suis actuellement en stage et je doit construire un plasmide ré combinant.
Je mal à comprendre comment peut on jouer sur les séquences, et faut il toujours commancer par le triple ATG??? des amorces pour faire la PCR et la place de la PCR dans la vérification de l'intégrité des plasmides??
et merci d'avance
Bonjour,
Je ne comprend pas bien ta question. Pour construire un plasmide recombiannt tu as besoin de ta séquence d'intêret c'est à dire celle que tu veux intégrer dans le plasmide. Tu l'obtiens en l'amplifiant par PCR ou en digerant directement ton ADN par une enzyme de restriction.
Ton fragement d'intêret peut possèder plusieurs sites de restriction spécifiques à l'enzyme utilisée: on obtient alors plusieurs fragments d'ADN dont un seul comprend le gène d'intéret. L'ADN plasmidique ne doit contenir qu'un seul site de restriction spécifique, au sein d'un gène de sélection. L'ADN est ouvert à ce niveau. On réunit l'ADN chromosomique fragmenté et l'ADN plasmidique par ligation. .....
Les principes généraux sont décrits dans ce lien:
http://mescoursdebio.chez-alice.fr/b...%20clonage.pdf
La PCR peut être utilisée pour vérifier que ton fragement d'intérêt et bien intégré au plasmide.
J'espère que cela pourra t'aider.
