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differencier deux gel d'agarose de concentration différente



  1. #1
    hana19

    differencier deux gel d'agarose de concentration différente


    ------

    Bonjour, je ne sais pas si le forum est adéquate mais je voudrais poser une question sur un tp de biochimie.

    j'ai réaliser un tp de biochimie ou l'on devait identifier la masse moléculaire du lysozyme.
    Nous avons fabriquer 2 gels de concentration différente: un de 10% et un de 15%.
    ceux ci ce sont mélangés et je ne sais plus lequel est de 15% et lequel est de 10%.
    donc je cherche à les différencier !

    On a 2 colonne ayant tout deux les meme marqueurs moléculaire (molécules de même taille) pour 2 gel de concentration différente
    Cependant, les taches du gel 1 sont plus espacées et migre plus loin que celles du gel 2.
    donc je dirais que celles qui migre le plus loin et dont les taches sont plus espacée sont celle de la concentration moindre donc celle de 10%.
    sachant également que celui que j'ai indiqué comme étant le moin concentré il y a des taches de grande taille qui n'apparaissent pas

    je voudrais avoir confirmation mais en fait j'ai trouver sur internet
    l'utilisation de gel d'agarose à forte concentration (3 à 4%) est nécessaire pour des fragments inférieurs à 150 pb, car elle permet une meilleure séparation et résolution des différentes bandes en fonction de leur différence de taille

    quand on parle de séparation, est-ce qu'il s'agit d'espacement des taches!
    cela remet en cause mon raisonnement ...

    merci !!!

    -----

  2. #2
    Anetheron

    Re : differencier deux gel d'agarose de concentration différente

    Bonsoir,

    à priori le raisonnement est exact, si la migration s'est faite exactement dans les même conditions, le gel où le bleu de charge a migré le plus loin (ou celui où le marqueur de taille a les bandes les plus espacées) est le moins concentré en agarose. Par contre les concentrations me semblent vraiment très élevées, es-tu sûr que ce n'est pas 1.0 et 1.5%?

    Concernant la fin du message, utiliser une concentration forte permet de mieux retenir les petits fragments , c'est donc indiqué lorsq'on a des fragments de taille inférieure à 150 pb. On perdra alors les plus gros, qui migreront très peu (voire pas du tout) et ne seront pas séparés.
    A l'inverse il faudra que le gel soit peu concentré pour séparer des gros fragments (simplement pour leur permettre de passer à travers du gel), mais dans ces conditions on perdra les petits fragments qui migreront tellement qu'ils risquent de sortir. Tout est affaire de choix par rapport à ce que tu souhaites faire migrer, pour l'ADN il existe des tableaux indicatifs donnant la gamme de pourcentage en agarose adaptée en fonction de la taille du ou des fragment(s) d'intérêt.
    Dernière modification par Anetheron ; 19/04/2011 à 21h27.

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