dosage du glucose danns le coca

[invitecd9c4968]

dosage du glucose danns le coca
Bonjour, je n'arrive pas à trouver la solution à mon problème, pouvez-vous m'aider s'il vous plaît? Je vous donne l'enoncé:

"donnez l'expression littérale de la concentration massique du glucose dans le coca"

pour cela on à dégazé 150mL de coca, à partir de laquelle on a préparé une solution mère 250µL dilué dans 500mL (dilution au 1/2000eme).
Puis on a prélevé 60µL de solution mère et mis dans une cuve avec une solution enzymatique contenant l'ATBS (volume total de la cuve: 3,06mL). On a mesuré l'absorbance à 430nm. Dans le cas du coca, on obtient: A=0,140 et pour le coca light: A=0,037 et on avait aussi un réactif témoin à A=0,050 et un témoin de glucose de concentration: 6µg/mL

A partir de là, j'obtiens:
[ech]=([témoin]*(Aech-Atr))/(Atémoin -Atr) résultat en µg/mL

tr:témoin réactif

je multiplie par 10^-3 pour passer en g/L

puis je sais que Cm=C/V mais à partir de là je trouve un résultat complètement aberrant. Je devrais trouver quelque chose de l'ordre de 50g/L mais j'ai quelque chose à 118,32g/L.

Pouvez-vous m'aider à comprendre où j'ai fait une erreure s'il vous plaît?
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[invite71f23525]

Le témoin a une absorbance de 0.05 pour une concentration de 6µg/ml. Toi tu obtiens des absorbances et tu souhaites avoir la concentration. Donc il faut que tu connaisses le coefficient te permettant de passer d'une absorbance à une concentration. Selon la loi de Beer-Lambert, tu as une droite linéaire passant par l'origine donc d'équation y = ax où y est l'absorbance et x la concentration. Grâce au témoin tu peux déterminer a qui est le coefficient directeur de la droite :

a = y/x soit a = Absorbance/concentration = 0.05/6 = 0.0083

Pour connaitre les concentrations de tes échantillons, il te suffit donc de diviser l'absorbance par le coefficient directeur qu'on vient de calculer :

Coca : 0.140/0.0083
Coca light : 0.037/0.0083

Pour le reste, une chose n'est pas claire pour pouvoir continuer le calcul et remonter jusqu'à la solution mère : 1) le témoin de glucose est à 6 µg/ml et tu en as mis 60 µl dans la cuve comme pour tes échantillons? 2) Est-ce que le témoin glucose est à 6 µg/ml dans la cuve? Si c'est le 1) tu as directement la concenttration en glucose dans la solution fille de tes échantillons. Si c'est la 2), il te faut tenir compte de la dilution de la solution fille dans la cuve qui est une dilution au 1/50ème pour connaitre la concentration de la solution fille.

Ensuite tu multiplies par 2000 et tu as la concentration de la solution mère.

[invitecd9c4968]

Merci LXR de m'avoir répondu, mais je pense que je me suis mal m'exprimée.

Dans mon expérience, je pars d'une solution mère de 500mL dont le facteur de dilution est 2000.

Puis à partir de cette solution mère, je prélève 60µL que je mets dans une cuve de volume total 3,60mL.

Puis je fait un témoin réactif qui contient tout les produits sauf du coca et dont l'absorbance est de 0.05.

De plus, je fais un témoin positif contenant ma solution enzymatique et du glucose pur. La concentration de cet échantillon est de 60µg/mL.

Et comme j'utilise un spectrophotomètre à double faisceau je fais mes mesures d'absorbance contre de l'eau distillée.

J'obtiens donc les absorbances suivantes:
témoin réactif= 0.05
témoin positif=0.515
coca=0.140
coca light=0.037

Par contre je ne fais pas de gamme étalon! donc comme tu me le suggère j'ai utilisé la loi de Beer Lambert. Sauf que je n'ai pas le coefficient d'extinction molaire. Donc voilà comment je fais:
Je pose: Ci x Vi = Cf x Vf

Et sachant que:
epsilon = A/(lC)

et je garde l'hypothèse que epsilon est le même pour ma solution initiale et finale car mon réactif témoin me permet d'éliminer tous les autres composants de mes solutions dosées. De plus, l est la même pour tous les dosages car je ne change pas de spectro, tout comme le volume qui est de 3.06mL pour tous mes échantillons dosés. Il me reste donc:

(Céch / Aech) = (Cétalon x Aétalon)
donc:
[ech]=(Aech x Cétalon) / (Aétalon)

Tout en tenant compte que les absorbances mesurées se définissent par: A = Alue-Atémoin réactif

(ex: Acoca = 0.140 - 0.05 )

J'obtiens donc la concentration molaire en sucre de mon coca (ou coca light) dans la cuve.

Après calcul, j'obtiens: [coca] = 1.16 . 10^-3 g/L

[coca light] = 1.148 . 10^-3 g/L

C'est pour la suite que je galère...

A partir de là, je dois trouver la concentration massique de ces deux échantillons.

Donc moi je pensais à:

Cm = C/V soit: Cm = (Céch x Vpe x facteur de dilution) / Vcuve

Avec mon volume de cuve = 3.06mL
Et mon volume de prise d'essai = 60µL

Le hic c'est qu'avec la conversion de la masse molaire de µg/mL en g/L j'ai multiplié par 10^-3 et que c'est cette puissance qui me fausse mes résultats...

Avec le 10^-3 dans le calcul j'obtiens:

Cm (coca) = 4.55 . 10^-2 g/L
Cm (coca light) = 4.503 . 10^-2 g/L

et en faisant le calcul sans cette fameuse puissance, je ne te fais pas de dessin, j'obtiens:

Cm ( coca ) = 45.5 g/L
Cm (coca light ) = 45.03 g/L

Ce qui est GENIAL car il y environ 106 g/L de sucre noté sur l'étiquette (ce qui correspond au saccharose)! sauf pour ma conversion entre les calculs de masse molaire et massique...

Donc tu me conforte dans l'idée d'utiliser la loi de Beer Lambert mais pour après je suis toujours bloquée. Je dois rendre ce compte rendu lundi, et si toi non plus tu ne peux pas m'aider à comprendre mon erreur, je pense que je vais devoir bidouiller un peu...

Quoi qu'il en soit merci de ta réponse,

Cordialement...

[invite71f23525]

Tu te compliques trop la vie!

J'ai toujours besoin de savoir si les 60 µg/ml (ou 6 µg/ml, je ne sais plus car dans ton premier message du as écrit 6 µg/ml) du témoin sont la concentration du milieu réactionnel ou si c'est la concentration d'un échantillon témoin (prélèvement de 60 µl de cet échantillon témoin que tu met dans le milieu réactionnel de 3 ml). Cela change tout pour le calcul.

Pour la procédure expérimentale, elle n'est pas du tout au point, le blanc se fait justement avec tous les réactifs sauf le coca (ou alors tous les réactifs y compris le coca, sauf l'enzyme), et non pas avec l'eau distillée. Ainsi, tu n'aurais pas eu besoin de soustraire à chaque fois l'absorbance du témoin réactif, c'est dommage.

Tu parlais de calculer l'epsilon, l'epsilon est le coefficient directeur de la droite A=f(C), c'est ce que j'ai calculé dans mon message précedent avec des valeurs fausses.

Ensuite tu t'obstines à vouloir convertir une concentration massique en....une concentration massique. Regardes :

J'obtiens donc la concentration molaire en sucre de mon coca (ou coca light) dans la cuve.

Après calcul, j'obtiens: [coca] = 1.16 . 10^-3 g/L

[coca light] = 1.148 . 10^-3 g/L

C'est pour la suite que je galère...

A partir de là, je dois trouver la concentration massique de ces deux échantillons.

Ce qui est en gras, j'appelle ça une concentration massique et non molaire comme tu le dis. Ayant déjà une concentration massique, il ne te reste plus qu'à savoir quel facteur de dilution te permet de remonter au coca pour connaitre sa concentration. Tu connais déjà le facteur de dilution de la solution mère (2000), et il faut juste savoir si ton témoin positif est à 60 µg/ml dans 60 µl ou dans le milieu réactionnel total, ce qui n'est pas la même chose.

Au final, c'est très simple mais tu complexifies inutilement chaque étape.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitecd9c4968]

Tu as sans doute raison...

pour l'étalon, on a prélevé 60µL d'une solution à 100µg/mL et on a complété avec 3mL de solution enzymatique.

Il est vrai du coup que je peux avoir facilement l'epsilon...

Quand au blanc tu as raison, mais on ne fais que suivre le protocole distribué par la prof...

[invite71f23525]

Donnes ta réponse, maintenant que c'est plus clair, je pourrais te dire si tu as juste ou pas.

[invitecd9c4968]

alors, j'ai tous repris de 0...

deja dans mes 3,06mL de cuve j'ai une solution de glucose a 1,96.10^3 g/L de coeff d'extinction molaire 2,37.10^-4.

et du coup je trouve pour le coca: 23,16g/L et pour le coca light 2,15g/L...

pour le coca light ca me parait bien et pour le coca normal ca me parait peu... je vais voir s'il y a d'autre sucre entrant dans la composition du coca pour atteindre a peu pres les valeurs etiquetees...

Merci pour ton aide, j'espere que tu confirmes...

[invite71f23525]

Pour le coca, je trouve 38.71 g/L, pour le coca-light il y a un problème car son absorbance est inférieure à 0...(0.037-0.05 = -0.013....).

[invitecd9c4968]

bonjour,

Je te remercie de ton aide, elle m'a ete tres utile... J'ai trouve le meme resultat et pour le coca light, selon ma prof il faudrait prendre les valeurs absolues des absorbances negatives... c'est un peu fumeux mais
bon si elle mets des bonnes notes c'est cool!

bon dimanche a toi!

[invite71f23525]

C'est bien que tu es trouvé le même résultat, mais tu as bien compris au moins? Car trouver le bon résultat pour avoir une bonne note, c'est pas suffisant, il faut avoir compris chaque étape et pouvoir adapter le calcul en fonction des modifications de protocole. C'est le genre de choses qu'il faut faire tous les jours en labo, c'est très important.

L'histoire de prendre les valeurs absolues, c'est n'importe quoi! Si vous faites ça une fois que vous serez en labo, c'est la garantie d'avoir n'importe quoi comme résultat. Le mieux lorsqu'on rencontre ce genre de problème, c'est rien calculer du tout car on ne peut pas calculer. Il faut tout refaire pour trouver un résultat correct et surtout ne pas rencontrer à nouveau le problème. Il aurait été plus constructif que le professeur vous demande quelles solutions vous envisageriez pour résoudre ce problème expérimental d'absorbance négative. Ca aussi on le fait tous les jours en labo. Et je commencerais par faire le blanc directement avec le coca et les réactifs sans l'enzyme, sans passer par une soustraction intermédiaire avec un témoin négatif.

Bonne fin de week-end.

[invitecd9c4968]

oui j'ai bien compris c'est bon, c'etait meme assez important que je comprenne etant donne que j'ai un examens dessus...

je sais que le coup de la valeur absolue c'est n'importe quoi mais bon, je vais pas essayer de la facher!

bonne journee