pcr comment commencer

[invitec543fba0]

Salut. Je suis face a un probleme qui concerne le design de primer.
Je suis cencer realiser une transfection pour obtenir la secretion d'une proteine par des cellules H4. Parallelement on me demande de realiser des primers correspondant a la sequence en acides nucleique de cette proteine donc:
Question 1. Pourquoi devrais-je amplifier un ADN puisqu'il est exprimer par les cellules apres la transfection?
Question 2. Je dispose de la sequence, et apres? Je connais et comprend le principe de la PCR. J'ai bien lu differents topic dont http://forums.futura-sciences.com/bi...liser-pcr.html , mais je bloque et je me retrouve avec ma sequence sans savoir quoi en faire.
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[invitea74316c7]

Il s'agit apparement d'une expérience de clonage. Tu vas designer des primers afin d'amplifier la séquence génomique ou ADNc de ta protéine. Tu vas donc effectuer ta pcr sur le tissu qui exprime ta protéine. Une fois que tu as ta séquence amplifiée tu vas la cloner dans un plasmide. Enuite tu vas transfecter ton plasmide dans des cellules et si tout se passe bien tes cellules devraient produire ta protéine en question.

[invitec543fba0]

C'est exactemen ca sauf que le plasmide est deja pret a etre transfecte. Donc je ne trouve pas de raisons valables pour amplifier cet ADN.

[Flyingbike]

peut être pour voir si la construction est exprimée dans les cellules...

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitea74316c7]

Ouais il peut s'agir de PCR de détection simplement!

[invitec543fba0]

Oui j'en est parler avec plusieurs personnes et cette PCR est permet juste de verifier si le gene a l'interieur du plasmide est ok. Merci pour vos reponces!