Bonjour,
mon probleme avec la RT-qPCR est: pourquoi pour la RT-qPCR il faut utiliser une dilution et pas le produit RT "concentré"? par example si avec une dilution 1/2 on obtient un Cp de 28, avec le produit RT il serait 27, et c'est aussi un Cp correcte!
merci en avance...
Parce que lorsqu'on dilue un produit de RT, c'est surtout pour diluer le milieu réactionnel de la rétro transcription, qui contient tout un tas de choses qui peuvent nuire a la pcr quantitative. Ton exemple est correct en théorie, mais en pratique ça ne se passe pas du tout comme ça. Mettre un produit de RT plus concentré fait que effectivement il y a plus de matrice, mais il y a aussi plus de produits interférant avec la réaction.
On perd ainsi l'efficacité de la pcr. Par expérience, les points de gamme qui posent problèmes sont la plupart du temps les plus concentrés.
Merci beaucoup.
