Pcr

[inviteccae2add]

Salut, tout le monde,
svp je veux savoir le principe de la PCR-quantitative et quelle est la différence entre la PCR quantitative et en temps réel????
merci d'avance.
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[invitee863e61a]

Salut, tout le monde,
svp je veux savoir le principe de la PCR-quantitative et quelle est la différence entre la PCR quantitative et en temps réel????
merci d'avance.

La PCR en temps-réel permet de déterminer la quantité initial de matrice. En cela , elle est quantitative et on l'appelle parfois comme cela. Pour le principe, il existe des tas d'autres sujets, des cours, des schémas partout sur le forum et sur internet.

[invite853321bf]

La PCR en temps réel est une PCR où on suit l'amplification d'ADN en temps réel, point. Le fait de déterminer la quantité intiale n'est qu'un bonus, une possibilité qu'elle offre mais qui n'est pas obligatoire.
On se sert de molécules fluorescentes qui, avec des particularités selon la méthode utilisée, va permettre de suivre la synthèse des amplicons au cours de la réaction, en ne ciblant que les spécifiques ou non. On pourra ainsi obtenir des courbes représentant l'augmentation de la fluorescence (et donc incidemment de l'ADN) en fonction du nombre de cycles effectué.
Ca permet entre autres d'éviter de faire un gel d'électrophorèse, la réponse est visible instantanément.
Cette technique se caractérise par ce qu'on appelle le Ct (ou Cq selon les appareils) il s'agit en fait du cycle auquel un puits dépasse un seuil théorique,

Si on passe une gamme d'ADN, ie une série de puits dont on connait la quantité d'ADN mise dans chacun, on pourra établir une droite reliant la quantité d'ADN et le Ct (principe d'amplification de la PCR, cf wikipedia si des doutes là dessus). Ainsi en connaissant le Ct d'un échantillon, on pourra estimer la quantité d'ADN initiale. Et ça c'est une qPCR en Temps Réel.

Appeler toute PCR temps réel qPCR est un abus de langage.
Pour plus d'infos http://pathmicro.med.sc.edu/pcr/realtime-home.htm