pH protéines hydrosolubles animales

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Bonjour à tous,

Je suis actuellement en stage de 2ème année de DUT. Mon sujet étant "Recherche de biomolécules actives antimicrobiennes dans les gammares (petits crustacés) du fleuve Saint-Laurent".

Les biomolécules antimicrobiennes ciblées sont les protéines hydrosolubles.

J'ai du fabriquer moi-même un protocole expérimental. J'ai donc effectué des recherches bibliographiques afin de trouver une manière d'extraire ces protéines.

Je vais tenter un fractionnement aqueux (broyage de 20 gammares dans de l'eau physiologique + du tampon phosphate 0,1M et pH7,2) suivit d'une centrifugation (séparation culot avec carapace, du surnageant contenant les substances hydrosolubles) et d'une lyophilisation. Cependant, je ne sais pas quel est le pH des protéines hydrosolubles présentent dans un animal. Je l'ai donc supposé être à pH7,2 car c'est le pH intracellulaire humain, d'où le tampon phosphate à ce pH.

Est-ce juste ? Sinon, que proposez-vous ?

Merci d'avance pour votre aide.
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[invite28f6e6c6]

Le pH des protéines hydrosolubles n'a pas d'importance dans la solubilisation des protéines. Il faut simplement être dans un tampon permettant de maintenir les protéines en solution.
Le pH peut jouer, comme la concentration en sels ou la présence de détergent.
Seul l’expérience pourra te dire si tu as extrait les protéines d'interet.
Personnellement, je garderais le culot pour le reprendre dans un autre tampon.

[invite1dd6a4e2]

Merci pour cette réponse.

Comment pourrai-je vérifier que les protéines d'intérêt sont bel et bien dans ma solution ? Par un dosage par la méthode de Bradford par exemple ?

[invite28f6e6c6]

Oui en partie.
Surtout je testerais soit la présence des protéines d'interet par WB ou par leur activité antimicrobienne.

[A voir en vidéo sur Futura]